河南省番茄上双生病毒的分子鉴定

摘要

双生病毒是一种具有孪生颗粒形态的单链环状DNA植物病毒，它会引起许多种重要的经济作物病毒病害。在中国，云南、广西、广东等省相继发现了多种经济作物上带有双生病毒，例如番茄、烟草及番木瓜等。双生病毒的寄主范围十分广泛，突变概率大。为了了解河南地区侵染番茄的双生病毒的情况，并为有效开展针对于此病毒的防控研究，我们于2012-2013年间在河南郑州、洛阳、开封、新乡、安阳、南阳、信阳、驻马店、商丘、许昌、长葛和三门峡12个区市的番茄主产区采集了59份具有双生病毒典型症状的番茄样本，并对其进行了病原分子致病性鉴定和变异分析，主要结果如下：
　　（1）利用粉虱传双生病毒简并引物PA/PB，对采集的59个样品进行PCR分子检测，其中36个样品检测到约500 bp特异性条带，检出率为61％，即36个样本均受粉虱传双生病毒侵染。病毒分离物中DNA-A部分序列和NCBI已登录的TYLCV分离物序列的同源性均大于99%，判断河南省内侵染番茄的双生病毒种类为TYLCV。
　　（2）随机选取9份病毒分离物进行DNA-A全长序列的克隆及序列分析，所检测的9份分离物的DNA-A全长序列均为2781bp，其序列同源性均大于98.6%，并且TYLCV-Israel Australia分离物DNA-A的序列同源性均大于98.7%，由此可见，河南省内侵染番茄的双生病毒种类为TYLCV。
　　（3）基于DNA-A基因全序列构建的系统进化树可以看出：所检测样品中的7份病毒分离物均与其临近省份的病毒分离物亲缘关系较近，这些地区病原的可能来源途径是由其临近省份经带毒媒介粉虱传入；但HNXC2和HNXY1两份分离物与新疆分离物（TYLCV-KSCT016）亲缘关系较近，而二者的地理位置相差较远，该地区的病原可能是通过带毒蔬菜或种苗调运传入。
　　（4）在长葛两样品中检测到约为1.3kb的DNAβ特异性条带。序列测定结果表明两分离物的DNAβ序列全长均为1347nts，同源性为100%。两病毒分离物卫星DNAβ与TYLCV-DX2来自越南的一种番茄黄化曲叶病毒伴随卫星DNAβ的同源性最高，达到90%。该研究首次发现TYLCV同时伴随有DNAβ的现象。

目录

第1章 绪 论

1.1双生病毒的概述及危害

1.2 双生病毒的分类

1.3 伴随菜豆金色花叶病毒的小分子DNA

1.4双生病毒的侵染

1.5 双生病毒的变异和重组

1.6 双生病毒对RNA的沉默抑制

1.7 双生病毒的检测

1.8 侵染番茄的双生病毒的发生和防治

1.9 本研究的目的意义

第2章 材料和方法

2.1 材料

2.2方法

第3章 病毒分离物DNA-A的分子检测

3.1 病毒分离物DNA-A部分片段扩增、克隆与序列分析

3.2病毒分离物DNA-A全长序列的扩增、克隆及序列分析

3.3 讨论

第4章 病毒分离物卫星DNAβ的分子检测

4.1卫星DNAβ扩增、克隆及序列测定

4.2卫星DNAβ序列分析

4.3卫星DNAβ的系统发育分析

4.4 讨论

第5章 总讨论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果