复方发酵中草药对鲤鲫草鱼生长非特异性免疫和抗病能力的影响

摘要

目的：水产品生产过程中抗生素的大量使用，导致抗生素等药物残留问题的日益突出，本文旨在研究抗生素的替代产品多菌种混合复方发酵中草药的最佳工艺条件和其对三种常见淡水鱼生长、免疫性能和抗病能力的影响，为绿色水产饲料添加剂和鱼病防治药物的开发奠定基础。
　　方法：1采用米曲霉（Aspergillus oryzae）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subitilis）、植物乳酸菌（Lactobacillus plantarum）、产朊假丝酵母（Candida utilis）为复合发酵菌种，麸皮、豆粕、中药（复方1：黄芪18份，党参12份，当归10份，白术8份，茯苓4份，柴胡3份，陈皮3份，山楂4份，麦芽6份，艾叶4份，黄芩6份，板蓝根4份，大黄4份，甘草6份，生姜3份）2：1：7的比例组成发酵基质，以纤维素酶活力为指标，先进行单因素实验，然后，通过正交试验的方法，选择最优发酵条件组合。
　　2将最优发酵条件下制得的复方发酵中草药应用到鲫鱼饲料中，采用随机分组的方法，挑选澎泽鲫360尾，分成3组，每组6个重复，每个重复20尾鱼， A组（阴性对照组）仅投喂基础饲料，B组（阳性中药对照组）投喂基础饲料+0.3％的中药，C组（复方发酵中药组）投喂基础饲料+0.3%的复方发酵中药，喂养至61d，测定各组澎泽鲫幼鱼生长及免疫各项指标。
　　3将最优发酵条件下制得的复方发酵中草药应用到鲤鱼饲料中，挑选鲤鱼600尾，按照随机数字分组的方法分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复20尾鱼。分别投喂以下饲料,A阴性对照组：投喂基础饲料;B阳性中药对照组：投喂基础饲料+0.3%的中药;C复方发酵中药低剂量组：投喂基础饲料+0.1%的复方发酵中药;D复方发酵中药中剂量组：投喂基础饲料+0.3%的复方发酵中药;E复方发酵中药高剂量组：投喂基础饲料+0.5%的复方发酵中药，试验共20d。试验结束后测定各组黄河鲤幼鱼生长及免疫各项指标。
　　4在植物原料中依次添加0.11%、0.33%、0.55%、0.77%、1.1%、3.3%、5.5%、8.8%的复合中药作为发酵基质，采用米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳酸菌、产朊假丝酵母为复合发酵菌种，测定各组总菌数、棉酚去除率、硫甙去除率和乳酸含量。确定最适添加量后，采用随机分组的方法，挑选草鱼600尾，分成5组， K组（阴性对照组）：投喂基础饲料；L组（阳性中药组1）：投喂发酵饲料；M组（阳性中药组2）：投喂发酵饲料+0.3%中药；N组投喂发酵饲料+0.3%单独发酵的中药；P组：投喂发酵饲料+0.3%和发酵基料混合发酵的中药，喂养至60d，测定各组草鱼鱼种生长及免疫指标。
　　5、以复方中药为发酵基质，米曲霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和嗜酸乳杆菌作为复合发酵菌种，以豆粕、麸皮、复方中药（复方2：大黄100g，板蓝根100g。黄芩50g，黄柏50g，金银花30g，苦参20g。黄芪，40g，当归，40g，五倍子30g。知母30g。生地400g，玄参，40g，玄明粉40g，甘草15g）1：2：7的比例组成发酵基质。纤维素酶活力和总菌数为指标，通过单因素试验和正交试验的方法，探讨多菌种混合复方发酵中草药的最佳工艺条件。挑选规格整齐，无伤病的澎泽鲫720尾，分成治疗群和预防群，每群按照随机数字分组的方法分为6个处理，每个处理3个重复，每个重复20尾鱼。预防群中先投喂基础饲料或药饵7天后，按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水气单胞菌感染，治疗群先按照0.1ml/尾腹腔注射嗜水气单胞菌感染，6小时后投喂药饵或基础饲料。具体分组为，A阴性对照组：投喂基础饲料，不感染，注射和试验组菌液同等剂量的生理盐水；B阳性中药组1：腹腔注射0.1ml/尾嗜水气单胞菌感染（以下同）；C阳性对照组2：投喂基础饲料+2%的中药，感染；D复方发酵中药低剂量组：投喂基础饲料+1%的复方发酵中药，感染；E复方发酵中药中剂量组：投喂基础饲料+2%的复方发酵中药，感染；F复方发酵中药高剂量组：投喂基础饲料+3%的复方发酵中药，感染。及时统计死亡数。
　　结果1自然 PH值，总接种量10%，米曲霉、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母、植物乳酸菌接种比例1:2:1:1的条件下，复合菌种固态复方发酵中药的最佳工艺参数为，发酵时间84 h，好氧厌氧时间比2:1，初始含水量65%，发酵温度为32℃，纤维素酶活力达到42.37 u/g。
　　2饲喂添加量0.3%的复方发酵中草药饲料后，澎泽鲫体重增长率提高了33.5%，饵料系数降低了0.06，复方中药经发酵后体重增加率相比较未发酵中药提高了27.4%，饵料系数降低了0.07。饲喂60d后，复方发酵中草药 SOD、MDA、LSZ、BUN相比较对照组均具有显著差异（P<0.05)。
　　3饲喂添加量0.3%的复方中药饲料后，黄河鲤体重增长率提高了5.4%，饵料系数降低了6.0%，复方中药经发酵后体重增加率相比较未发酵中药提高了11.7%，饵料系数降低了8.1%；复方发酵中草药0.1%组和中药0.3%组各项指标无显著差异。复方发酵中草药各试验组均有刺激黄河鲤非特异性免疫，增强抗病能力，促进免疫器官发育的作用，饲喂20d后，复方发酵中草药0.3%和0.5%组SOD、MDA、LSZ、TP、ALB、BUN、脾体指数相比较对照组均具有显著差异（P<0.05),复方发酵中药在黄河鲤幼鱼饲料中的最适添加量为0.3%。
　　4中药在0.11%～0.77%的浓度范围内，有利于发酵过程中乳酸含量提高和棉酚、硫甙的降解，在添加量大于3%时，不利于植物原料的微生物发酵；植物蛋白原料中添加0.3%的复合中药共同发酵后，相比较对照组，增重率提高了37.8%，饵料系数降低了17.2%，LSZ、SOD、SBI均有显著提高（P<0.05)，而MDA、GOT、GPT、Cr则显著降低（P<0.05)，说明生物发酵饲料对草鱼鱼种具有明显的促生长及提高非特异性免疫、增强抗病能力的作用；中药和植物原料单独发酵和混合发酵均对草鱼鱼种的生长和非特异性免疫能力的提高具有促进作用（P<0.05)，但两者之间没有显著差异（P>0.05)。
　　5固态复方发酵中药（复方2）的最佳工艺参数为，发酵时间72 h，初始含水量60%，总接种量9%，纤维素酶活力达到15.02 u/g。饲喂添加量2%中药的饲料后，预防组澎泽鲫成活率提高了52.5%，治疗组提高了35%，相比较等添加量的未发酵中药，复方发酵中药预防组成活率提高了22.5%，治疗组提高了30%，复方发酵中药和中药对嗜水气单胞菌引起的鲫鱼出血病均有明显的预防和治疗作用（P<0.05），且复方发酵中药使用的效果优于未发酵中药。
　　结论1复方发酵中草药（复方1）能显著提高常见淡水鱼鲤鱼、鲫鱼和草鱼的非特异性免疫能力，促进鲤鱼、鲫鱼和草鱼的生长，降低饵料系数,复方发酵中草药在饲料中的最适添加量为0.3~0.5%。
　　2复方发酵中草药（复方2）能有效预防和治疗彭泽鲫出血病，预防效果优于治疗效果，最适添加比例为2%。

目录

声明

符号表

第1章 文献综述

1.1 中草药在水产养殖中的应用

1.2 中草药对水生动物免疫能力、损伤修复方面的研究

1.3 益生菌在水产养殖中的应用

1.4 中草药对益生菌生长和代谢产物的影响

1.5 益生菌对中药成分的影响

1.6 中药与微生物的相互作用

1.7 益生菌复方发酵中药在动物生产中的应用

1.8 本次研究的目的和意义。

1.9 主要研究内容。

第2章 混合菌种复方发酵中草药工艺条件的研究

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.3 测定及分析方法

2.4 数据处理

2.5 结果

2.6 讨论

2.7 小结

第3章 复方发酵中草药对鲫鱼生长和非特异性免疫能力的影响

3.1 试验材料

3.2 试验方法

3.3 测定及分析方法

3.4 数据处理

3.5 结果

3.6 讨论

3.7 小结

第4章 复方发酵中草药对黄河鲤生长和免疫性能的影响

4.1 试验材料

4.2 试验方法

4.3 测定及分析方法

4.4 数据处理

4.5 结果

4.6 讨论

4.7 小结

第5章 中药和植物蛋白原料混合发酵生产鱼类生物饲料的研究

5.1 试验材料

5.2 试验方法

5.3 测定及分析方法

5.4 数据处理

5.5 结果与分析

5.6 讨论

5.7 小结

第6章 复方发酵中草药工艺优化及防治鲫鱼出血病的初步研究

6.1 试验材料

6.2 试验方法

6.3 测定及分析方法

6.4 数据处理

6.5 结果与讨论

6.6 小结

第7章 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间的研究成果

一 项目

二 论文