微生物酶法制备D-对羟基苯甘氨酸的研究

摘要

本研究试着寻找更快更有效的转化菌株，把来源于皮氏伯克霍尔德氏菌(Burkholderiapickettii)的表达该两种酶的两个基因同时克隆到大肠杆菌中，获得共表达两种酶的基因工程菌株，两个基因的顺序是Dcase基因在Dhase基因的前面，同一个启动子。重组的菌株能够稳定的表达两种酶，并且能够有效的转化乙内酰脲到相应的D型氨基酸。并且这种Dcase基因在Dhase基因之前的构建方式在22℃时培养比在37℃能够获得更高的生物量和酶活。并且发现这样的转化效率和第二个酶的表达水平有直接关系，表明在现有的工业生产条件下第二个酶的浓度是整个转化过程中的限制因素。

目录

论文说明：缩写表

摘要

第一章前言

1 D-对羟基苯甘氨酸的性质特征

2 D-对羟基苯甘氨酸的合成

2.1对羟基扁桃酸法

2.2乙醛酸法

2.3生物酶法

3微生物酶法制备D-对羟基苯甘氨酸的研究进展

3.1单酶法(又称一步酶一步化学法)

3.2双酶法制备D-p-HPG

3.3一菌多酶法制备D-p-HPG

3.3生物酶的获得--菌株的选育

4 D-对羟基苯甘氨酸市场情况

参考文献

第二章D-乙内酰脲酶基因(dha)的克隆、测序及表达

1引言

2材料和方法

2.1材料

2.2方法

3实验结果

3.1 MMR003菌株的细菌学分类鉴定

3.2 MMR003D-乙内酰脲酶基因的克隆

3.3 MMR003(Burkholderia pickettii)D-乙内酰脲酶基因在大肠杆菌中的表达

4讨论

参考文献

第三章D-乙内酰脲酶(dha)和N-脱氨甲基酶(dca)在大肠杆菌中的共表达

1引言

2材料和方法

2.1材料

2.2方法

3结果

3.1摇瓶发酵培养基的选择及最适发酵条件

3.2连续转化实验验证共表达的活力

4讨论

参考文献

第四章基因工程菌MMFY01初步的工业应用实验

1前言

2材料和方法

2.1材料

2.2方法

3结果

3.1基因工程菌MMFY01发酵结果

3.2野生型假单孢菌MMR003和基因重组假单孢菌MMYY01发酵结果

3.3工业替代摇瓶发酵实验

3.4转化实验

4讨论

参考文献

第五章结论

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