钠尿肽受体A(NPR-A)在小鼠眼球发育过程中的表达

摘要

NPR-A(natriuretic peptide receptor A，NPR-A)是钠尿肽家族中的重要一员，其本身也是鸟苷酸环化酶耦联受体，通过与钠尿肽结合，升高细胞内cGMP水平来介导钠尿肽的生理学效应。以往对于钠尿肽系统的研究主要集中在心血管系统和中枢神经系统，最近在眼中也发现有大量钠尿肽的表达，并发挥着重要的作用。首先，视网膜作为中枢神经系统的一部分，广泛表达钠尿肽，并且其在神经信号的传递中发挥着重要的作用。其次，在眼中的其它部位，如房水、睫状体等也有广泛的表达，并具有调节眼内压，控制青光眼等疾病的进展功能。但目前对钠尿肽及其受体在眼中的定位及作用仍存在很多争议，尤其是在眼角膜和晶状体内的研究成果十分有限。此外，以往研究总是集中在成年眼球，对胚胎期眼的研究在国内还尚未有系统的文献报道。本实验试图利用免疫组织化学法来检测NPR-A在胚胎期至成年小鼠眼角膜、晶状体和视网膜中的表达，并探讨其在维持眼的发育和视觉形成中的重要意义，从而加深对钠尿肽系统的了解，也为视网膜疾病的治疗提供新的资料！
　　目的:检测NPR-A在各年龄点小鼠角膜、晶状体以及视网膜中的表达，并探讨以下三个方面的内容:①NPR-A在角膜发育，以及对维持角膜上皮细胞修复中的重要意义。②NPR-A在晶状体发育、晶状体上皮细胞的增殖以及晶状体的通透性中的重要调节功能。③NPR-A在视网膜神经元发育及维持Müller细胞的功能活动中的重要调节作用。
　　方法:本课题应用石蜡切片免疫组织化学染色、墨汁灌流、铺片免疫荧光染色等技术对胚胎期和出生后小鼠角膜、晶状体、视网膜进行形态学观察，并对视网膜NPR-A阳性细胞突起的密度进行测量。
　　结果:1.NPR-A在角膜中的表达
　　在胚胎期，NPR-A开始出现小鼠角膜上皮细胞中，并持续高表达至成年，而角膜基质层的纤维细胞和内皮细胞中的表达随年龄的增长而逐渐减弱。在E16，NPR-A开始表达在角膜上皮细胞中，出生后进一步增强，P14达到高峰，之后持续高表达。另外，NPR-A也于El6在角膜基质和内皮细胞开始表达，P5时NPR-A表达进一步增强，且广泛的分布在成纤维细胞和内皮细胞中。P14之后，NPR-A的表达却显著减少，仅稀疏的分散在纤维细胞和内皮细胞的表面。
　　2.NPR-A在晶状体内的表达
　　从P0开始NPR-A开始高表达在晶状体前囊上皮细胞膜上，随着日龄增加，中部上皮细胞NPR-A表达减弱，至P90，免疫阳性细胞主要集中在赤道附近的上皮细胞膜中。此外，NPR-A也高表达于由后上皮细胞生成的初级纤维中，在El6开始出现，P0，大量表达在初级纤维细胞上。但在P7以后，NPR-A从中心向外周逐渐减少，至P90消失。同时NPR-A阳性纤维细胞形态也发生着改变，P0，纤维细胞围绕前极呈现较大、不规则的多边形结构，P3，周围细胞体逐渐增大、延长成梭形，P7，胞体变狭长呈丝状，并以同心圆结构排列。
　　3.NPR-A在视网膜中的表达
　　NPR-A广泛存在于视网膜神经元中。例如，在外核层，NPR-A于P7开始高表达在视锥、视杆细胞内、外侧突起上，在P14减弱，P30之后，持续稳定弱表达。在内核层，从P7开始NPR-A持续弱表达于双极细胞的突起中，而在水平细胞中未见NPR-A表达。在神经节细胞层，NPR-A于El6开始高表达在神经节细胞胞体中，P14时明显减弱，而在神经纤维层，NPR-A从胚胎期至成年持续高表达在神经节细胞的轴突中。在外网状层和内网状层，NPR-A于P14均高表达，但于P30之后逐渐减弱。此外，NPR-A还广泛的存在于Müller的终足和外侧突起中，并持续至成年。
　　结论:在角膜中，NPR-A参与角膜发育，并维持着角膜上皮细胞的增殖和损伤后的修复;在晶状体中，NPR-A与晶状体早期发育有关，而且在成年后可能参与了上皮细胞的增殖和生理代谢，以维持着晶状体的透明性，在视网膜中，一方面，NPR-A可能参与视网膜神经元的发育，并调节着神经细胞的迁移和分化。另一方面，其在Müller细胞的功能活动中起着非常重要的调节作用。

目录

声明

摘要

引言

1 材料、仪器与方法

1．1 实验动物及取材

1．2 实验材料

1．3 试剂配方

1．4 实验仪器

1．5 免疫细胞化学染色

1．6 墨汁灌流

1．7 参数测量及统计学处理

2 实验结果

2．1 NPR-A在小鼠角膜发育过程中的表达

2．2 NPR-A在晶状体发育过程中的表达

2．3 NPR-A在小鼠视网膜发育过程中的表达

2．3．1 NPR-A在视网膜神经元中的的表达

2．3．2 NPR-A在视网膜神经胶质细胞中的表达

2．3．3 Müller细胞与视网膜发育

3 讨论

3．1 NPR-A参与角膜发育，并维持角膜上皮细胞的增殖和修复

3．2 NPR-A参与晶状体修复和维持晶状体透明性

3．3 调节视网膜神经元发育和Müller细胞的功能

3．3．1 NPR-A是视网膜神经元发育的关键分子

3．3．2 NPR-A调节Müller细胞的功能活动

4 结论

参考文献

附录

图片说明

综述 钠尿肽在中枢神经系统的生理和病理学意义

致谢

攻读学位期间发表的学术论文