两株拮抗菌的发酵条件、定殖动态及生防效果研究

摘要

土传病害是植物病害中较难防治的一类病害。本研究对土传病害—大豆根腐病的生物防治进行了研究。从大豆根围土壤中分离筛选出13株对大豆根腐病有拮抗作用的细菌。通过平板对峙法检测，菌株BRF-1和BRF-2对供试的7株病原菌均有拮抗作用。依据生理生化特征并用16SrRNA分子技术鉴定BRF-1和BRF-2菌株的分类地位，通过测定菌株发酵培养液的OD吸收值、单位体积发酵液的含菌量以及无菌滤液的抑菌圈半径等指标，研究了影响两株生防细菌拮抗物质产生的因素、拮抗物质的提取方法及其理化性质。利用抗药性标记研究了两株细菌的定殖动态，分别用平皿计数法和变性梯度凝胶电泳(DGGE)法研究了两株拮抗菌对土壤微生物数量和多样性的影响，并利用盆栽试验研究了对大豆根腐病的生防效果。取得的主要结果如下： 1.利用三层筛选法从大豆根际分离出13株对茄腐镰孢菌(Fusariumsolani)具有拮抗作用的细菌，抑菌圈半径在2mm-12mm之间。其中两株拮抗作用较好的BRF-1、BRF-2菌株对尖孢镰孢菌芬芳变种(F.oxysporumVar.vedolens)，茄腐镰孢菌(F.solani)，禾谷镰孢菌(F.graminearium)，立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)，菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)，蕃茄枯萎菌(F.oxgsporumf.sp.lycopersici)和黄瓜尖孢镰孢菌(F.oxysporumf.sp.cucumerinum)也具有拮抗作用。 2.经过生理生化鉴定和16SrRNA分子技术鉴定，BRF-1菌株为类芽孢杆菌(Paenibacillustaejonensi)，BRF-2为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。 3.拮抗物质的产生条件实验：BRF-1菌株在装液量为20mL/250mL三角瓶、pH值为7.0的PSS培养基培养24h条件下，生长量和拮抗活性达到最大值。BRF-2菌株在装液量为20mL/250mL三角瓶、pH值为7.0的PSS培养基培养72h条件下，生长量和拮抗活性达到最大值。 4.拮抗物质的提取和性质：用硫酸铵沉淀可将BRF-1菌株产生的拮抗物质析出，拮抗物质含有低分子量的肽类物质，对高温高压及蛋白酶k稳定，对碱不稳定。BRF-2菌株产生的拮抗物质可用固体浸提的方法提取，特征为非蛋白类的水溶性的抗生素，对高温部分敏感，不耐强酸和强碱。 5.定殖动态：两株拮抗菌均能在土壤中很好定殖，接种后48d，BRF-1仍能维持在3.16×103CFU/克土壤以上，BRF-2能维持在6.3×104CFU/克土壤以上。菌株BRF-1和BRF-2均对土壤微生物数量和多态性产生不同程度影响，能提高土壤健康水平。 6.盆栽防效：BRF-1菌株和BRF-2菌株对大豆根腐病具有较好的防治效果，同时能够促进幼苗生长。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论

第五章结论

参考文献

致谢

附录

作者简历

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