冠心病患者MBL、CRP以及肺炎衣原体感染的变化及其相关性分析

摘要

目的：冠心病是最常见的心血管疾病之一，是一种严重危害人类健康的疾病，其病因和发病机制尚未完全阐明。近年来，感染、炎症与冠心病的关系成为研究的热点。本实验的目的在于检测冠心病患者与健康对照者MBL基因Exon I54位密码子点突变情况，同时测定血浆中MBL与CRP含量及肺炎衣原体感染情况，旨在通过分析这些因素的变化及相关性，探讨冠心病的可能致病机制，为其辅助诊断和治疗提供依据。 方法： 1 标本的收集与处理取100例冠心病(CHD)病人和60例健康对照人抗凝血，2小时内分离血浆与细胞成分，血浆于-80℃保存，供测定MBL含量、CRP及肺炎衣原体；用盐酸胍法提取血细胞中DNA，-80℃冰冻保存，供MBL基因突变检测。 2 测试标本 (1)用PCR-RFLP法测试MBL Exon I 54位密码子基因点突变：扩增体系为50μl，其中10×Buffer 5μl，dNTP(2.5mmol/L)4μl，primerl(50μmol/L)0.4μl，primer2(50μmol/L)0.4μl，TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.5μl，模板4μl，灭菌三蒸水补至50μl。扩增参数为：预变性95℃5分钟；95℃45秒、55℃45秒，72℃1分钟，循环30次； 末延伸72℃ 5分钟。扩增产物用TAE配制含0.5μg/ml溴化乙啶2％的琼脂糖凝胶电泳，加样5μl/孔，电泳30分钟；PCR Marker作为参照，对扩增产物进行分析。对扩增产物用限制性内切酶(Bsh N1)酶切：酶切体系为20μl，其中：Bsh N1(10u/μl)0.5 μl，10×Buffer 2μl，DNA扩增产物17.5μl，37℃水浴反应1小时，酶切产物用3％的琼脂糖凝胶电泳分析。根据酶切结果，针对性的选择部分完全切割、不完全切割和未切割的PCR扩增产物测序，进行序列分析比对。 (2)血浆MBL含量测定：按MBL ELISA试剂盒说明书。 (3)用肺炎衣原体IgG ELISA试剂盒测定衣原体感染情况。 (4)免疫比浊法测定Hs-CRP含量，在全自动生化分析仪上进行。 结果： 1 冠心病组、健康对照组MBL基因Exon 154位密码子点突变频率100例冠心病人MBL基因ExonI 54位密码子点突变情况，在所检测到的100例中，野生型(GGC/GGC)为73例，占73％；突变杂合子型(GGC/GAC)为25例，占25％；突变纯合子型(GAC/GAC)为2例，占2％。基因频率分别为GGC为85.5％，GAC为14.5％。 60例健康对照组MBL基因ExonI 54位密码子点突变情况，在所检测到的60例中，野生型(GGC/GGC)为45例，占75％；突变杂合子型(GGC/GAC)为13例，占27.67％；突变纯合子型(GAC/GAC)为2例，占3.32％。基因频率分别为GGC为85.8％，GAC为14.2％。经x<'2>检验，x<'2>=0.007，p=0.934，冠心病组、健康对照组基因点突变频率的比较差别无统计学意义。 2 血浆MBL含量测定100例冠心病人血浆MBL含量的平均值为3900μg/L，标准差为3209；60例健康对照组血浆MBL含量的平均值为2056μg/L，标准差为1824。冠心病组血浆MBL含量高于健康对照组，差别有统计学意义(p<0.01)。 3 冠心病组、健康对照组抗肺炎衣原体抗体(CP IgG)的测定100例冠心病人血浆CP IgG阳性51例，占51.00％；60例健康对照组血浆CP IgG阳性20例，占33.33％，二者有统计学差异(p<0.05)。 4 冠心病组与健康对照组血浆中CRP含量比较分析100例冠心病人血浆CRP含量的平均值为10.257 mg/L，标准差为12.216；60例健康对照组血浆CRP含量的平均值为1.488 mg/L，标准差为1.558，二者比较差别有显著统计学意义(p<0.01)。 5 冠心病人CP IgG阳性和阴性组血浆MBL含量的比较按CP IgG阳性和阴性将冠心病人分为两组，CP IgG阳性组和阴性组的血浆MBL均值(±SD)分别为3819(±3090)μZ/L和3985(±3359)μg/L，经t检验二者无统计学差异(p>0.05)。 6 冠心病人CP IgG阳性和阴性组血浆CRP含量的比较按CP IgG阳性和阴性将冠心病人分为两组，CP IgG阳性组和阴性组的血浆CRP均值(±SD)分别为10.439(± 13.451)mg/L和10.068(±10.921)mg/L，经t检验二者无统计学差异(p>0.05)。 7 冠心病组血浆中CRP与MBL含量比较及相关性分析按CRP水平升高(>3mg/L)与否将冠心病人分为两组，CRP水平升高组和CRP水平正常组的血浆MBL均值(±SD)分别为3723(±2783)μg/L和4258(±3961)μg/L，经t检验二者无统计学差异(p>0.05)。 在100例冠心病样本中，CRP与MBL含量使用Pearson相关性分析，r=0.144，p=0.245，没有发现二者有相关关系。 结论： 本研究对中国北方汉族冠心病患者和健康对照的MBL基因54位密码子点突变，MBL，CPIgG和CRP进行了检测。发现以下3点： 1 MBL基因54位密码子点突变在冠心病组、健康对照组分别为14.5％和14.2％，无统计学意义(p>0.05)。 2 血浆MBL，CRP均值(±SD)在冠心病组分别为3900(±3209)μg/L和10.26(±12.22)mg/L，在健康对照组分别为2056(±1824)μg/L和1.49(±1.56)mg/L。这两项指标在冠心病组较健康对照组均显著升高，差别有显著统计学意义(p<0.01)。 MBL与CRP属于炎症急性期蛋白，这两项指标在冠心病组较健康对照组均显著升高，提示该两项指标在冠心病诊断和发生机理中的作用应该进一步研究。虽然MBL和CRP在冠心病人显著升高，但是这两项指标之间不显示相关，提示它们可能以不同机理参与冠心病发生。 3 冠心病组血浆CP IgG阳性率为51.00％，健康对照组为33.33％，CP IgG在冠心病人中的阳性率较健康对照上升(p<0.05)，提示肺炎衣原体感染可能参与冠心病发生。

目录

摘要

前言

实验材料

实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

附表

附图

综述MBL与心血管疾病相关性研究进展

致谢

个人简历