丹参及同属混淆品种子的系统鉴别研究

摘要

丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的根及根茎，此外，在实际应用中还存在一些地方代用品与混淆品，如甘西鼠尾，荫生鼠尾，雪见草及多种同属植物。近年来，主产地栽培丹参逐步成为药材的主要来源，但是，种子市场基源品种混乱，而且同名异物、同物异名现象严重。几种鼠尾草属植物的种子在外部形态上非常相近，难以凭感官宏观鉴别。为确保丹参药材质量的稳定、可控，在规模化、规范化种植中首先要保证丹参种源纯化、优良。本实验从外观性状、显微特征、理化性质等方面，并利用细胞生物学、分子生物学技术及超微技术对鼠尾草属几种植物的种子进行综合鉴别研究。既有快速、简便、实用、满足基层需要的方法又有新技术与传统中药鉴定技术交叉融合的深层次鉴别研究，也是该省制定中药种子标准前重要的应用基础研究。 第一部分性状、显微、理化鉴别 目的：应用快速、简便、实用的方法，建立丹参、甘西鼠尾、荫生鼠尾、雪见草种子的外观性状、显微特征、超微特征、理化性质方面的综合鉴别信息指征。 方法： 1.外观性状观察。 2.种皮脱色表面片制备：(1)脱色：取种皮切成12 mm小块浸入水合氯醛(1：1)溶液中。(2)压片观察。 3.石蜡横切片制备：(1)取材和固定：种子F．A．A固定液固定一周以上。(2)脱水：依次用浓度为70％、80％、90％、95％的乙醇溶液、无水乙醇进行脱水，每隔2～3 h调换溶液。(3)透明：二甲苯：无水乙醇(1∶1)浸种1～2 h后，转入二甲苯中至种子透明为止。(4)浸蜡：65℃恒温箱中进行，半小时调蜡一次，至种子完全浸透。(5)包埋和切片：石蜡包埋，切片厚度12μm。(6)贴片和融蜡。(7)染色：番红－固绿双重染色。(8)脱水与封藏。 4.种皮扫描电镜观察：(1)清洗：取种子用50％乙醇超声清洗5min。(2)脱水：50％、60％、70％、80％、90％、100％乙醇逐级脱水，每一级脱水两次，每次30 min，其间不断震荡清洗。(3)固定：戊二醛固定30 min。(4)电镜观察：真空喷金后，进行观察。 5.紫外扫描图谱特征：(1)取过40目筛的种子粗粉各1.0 g用石油醚索氏提取3 h，制备供试液A；挥干石油醚用乙酸乙酯索氏提取3 h，然后挥干乙酸乙酯用甲醇索氏提取3 h，制备供试液B。(2)扫描波长为200～400 nm的紫外吸收图谱。(3)图谱分析。 6.薄层色谱鉴别：(1)取一定量种子粉末用石油醚索氏提取3 h制备供试液C，挥干石油醚用乙酸乙酯索氏提取3 h，制备供试液D，供点样；(2)点样，展开。(3)显色、观察、照相。 7.高效液相鉴别：提取：甲醇索氏提取样品中的成分；色谱条件：选用合适的色谱柱，调整流动相的组成、配比、pH、检测波长及流速，使样品中所含成分色谱峰的分离度符合测定要求。 结论：丹参、甘西鼠尾、荫生鼠尾和雪见草的种子在外观性状、显微特征、理化性质存在差异，可用于鉴别。方法快速、简便、实用。 第二部分细胞生物学及分子生物学特征研究 目的：利用染色体组型分析及种子蛋白质PAGE和SDS-PAGE技术研究药用丹参品种之间及鼠尾草属几种植物种子的综合鉴别信息指征，从细胞水平及分子水平鉴别真伪，并为丹参的品种筛选提供依据。 方法： 1.根尖体细胞染色体标本片制备：(1)预处理：种子25℃下萌发，根尖长0.5～1.0 cm时切取，蒸馏水4℃处理24 h。(2)固定：卡诺固定液(无水乙醇：冰醋酸3∶1)固定10～1.5 h。(3)解离：95％乙醇：浓盐酸(1∶1)解离10～115min。(4)后低渗：重蒸水低渗，时间8～15 min。(5)染色：改良石炭酸品红液染色。(6)封片：冰冻揭盖片，中性树胶封片。(7)显微照相、计数、测量。 2.聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)图谱特征研究：(1)制备供试品溶液。(2)制备分离胶和浓缩胶。(3)电泳：恒定电压120～180 V。(4)染色和洗脱：考马斯亮蓝(R-250)染色，脱色液洗脱至背景清晰为止。(5)结果分析：绘图并测定特征谱带泳动率。 3.SDS.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱特征研究：(1)制备供试品溶液。(2)制备分离胶和浓缩胶。(3)电泳：恒定电压80～120 V。(4)染色和洗脱：考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液染色，脱色液洗脱至背景清晰为止。(5)结果分析：绘图并测定蛋白分子量。 结论：应用分子生物学技术进行种子鉴别研究，消除了种子性状特征易受外界环境影响的特点，可以较根本的揭示丹参及其混淆品之间的差异。不但为丹参种源筛选提供依据，也为鼠草属的物种研究提供了一定的方法。

目录

摘要

引言

第一部分丹参及同属混淆品种子的性状、显微、理化鉴别

前言

材料与方法

结果

附图一

附图二

讨论

结论

参考文献

第二部分丹参及其同属种子的细胞生物学及分子生物学研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 中药种子的鉴别研究

致谢

个人简历