反应停对胶原诱导型关节炎大鼠关节炎症的影响

摘要

目的：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病，以关节滑膜炎，对称性、破坏性的关节病变为主要特征。病情逐步进展，最终导致关节功能障碍、致残。其病因尚不完全明确，多种免疫活性细胞的活化，细胞因子、炎症介质的共同参与，血管翳的形成是造成疾病发生、发展的重要原因。目前，改善症状的抗风湿药是RA的主要治疗手段，针对某些细胞因子的生物制剂在国内临床的应用还处于起步阶段。由于传统抗风湿药的毒副作用较大，而生物制剂价格昂贵，因而患者长期服用依从性差，不利于疾病控制，因此选择一种价效比良好的抗风湿药物势在必行。反应停是一种免疫调节剂和抗血管生成药，已应用于风湿性疾病的临床治疗，但国内对于RA的疗效罕有报道。本实验以Ⅱ型胶原诱导型性关节炎(CIA)大鼠模型为基础，从关节肿胀程度、血浆及滑膜组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor alpha TNF-α)、血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor VEGF)浓度的变化、关节病理改变、放射学改变几方面，观察反应停对关节炎的影响，评价其疗效，探讨反应停治疗RA的机制及临床应用价值。 方法：(1)将成年雄性Wistar大鼠随机分为Ⅰ组(正常对照组)、Ⅱ组(单纯造模组)、Ⅲ组(造模+反应停治疗组)、Ⅳ组(造模+甲氨喋呤治疗组)。Ⅱ～Ⅳ组多点皮内注射Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂，21天后腹腔注射加强免疫，诱导出关节炎模型。(2)从免疫后第12天开始Ⅲ组、Ⅳ组分别给予反应停200mg/kg·d、甲氨喋呤2.7mg/kg.w灌胃治疗。(3)测定不同时间点各组大鼠的踝关节外径，并进行关节炎指数(At)评定。(4)采用双抗体夹心ELISA法测定不同时间点各组大鼠血浆TNF-α、VEGF浓度。(5)对不同时间点各组大鼠滑膜组织进行TNF-α、VEGF的SP免疫组织化学染色，采用真彩病理图像分析系统进行定量分析。(6)观察不同时间点各组大鼠踝关节病理改变，并进行病理积分评定。(7)观察各组大鼠踝关节放射学改变出现的时间。(8)应用SPSS11.5统计软件进行统计分析。 结果：(1)AI：第Ⅱ组大鼠造模后各时间点AI均高于第Ⅰ组(P<0.01)，高峰出现在造模后21～28天；第Ⅲ组于造模后35～60天AI低于第Ⅱ组(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ组间AI无统计学差异(P>0.05)。(2)踝关节外径：第Ⅱ组大鼠造模后14天踝关节外径高于第Ⅰ组(P<0.01)，第21天肿胀达到高峰，之后逐渐下降，直到60天仍高于正常组(P<0.01)；Ⅲ、Ⅳ组于造模后第21天踝关节外径高于第Ⅰ组(P<0.01)，并达到肿胀高峰，至造模后60天与第1组无统计学差异(P>0.05)；Ⅲ组于造模后第28天踝关节外径低于造模组(P<0.05)，较Ⅳ组提前1周。(3)血浆TNF-α、VEGF浓度：第Ⅱ组造模后7天血浆TNF-α、VEGF水平均高于第Ⅰ组(P<0.05)，21天达到高峰后逐渐下降，其中TNF-α浓度于35天自行降至正常水平(P>0.05)，42天出现第二高峰；Ⅲ组、Ⅳ组血浆TNF-α、VEGF浓度分别在14、21天低于第Ⅱ组(P<0.05)；Ⅲ组、Ⅳ组之间两种细胞因子水平无统计学差别(P>0.05)。(4)滑膜TNF-α及VEGF的积分光密度(IOD)值、微血管密度(MND)、踝关节病理积分：造模后各时间点，第Ⅱ组均显著高于第Ⅰ组，有统计学差别；Ⅲ组TNF-α的IOD值在造模后21～60天低于Ⅱ组，VEGF的IOD值、MVD、踝关节病理积分均在14～60天低于Ⅱ组，具有统计学意义。(5)相关性分析：AI与踝关节外径呈直线正相关；血浆及滑膜中TNF-α与VEGF水平分别呈直线正相关，同时二者分别与踝关节外径、MVD、病理积分呈直线正相关。(6)放射学改变时间：第Ⅲ、Ⅳ组出现时间分别为造模后39.2±4.89天、39.8±5.90天，晚于第Ⅱ组23.8±3.61天(P<0.01)。 结论：(1)AI与踝关节外径呈直线正相关，均能反映关节肿胀情况，后者方法更为精确、客观。(2)造模后血浆及滑膜TNF-α、VEGF水平明显升高，并均与踝关节外径呈正相关，提示这两种细胞因子在RA病理过程中发挥重要作用。(3)造模组血浆及滑膜TNF-α、VEGF水平均呈正相关，二者相互影响，在RA病理过程中形成恶性网络。 (4)CIA大鼠滑膜VEGF表达、MVD值显著高于正常组，且二者呈正相关，说明VEGF是促进血管翳形成的关键细胞因子，在RA滑膜炎症之后的滑膜增生、软骨和骨破坏的病理过程中发挥着重要作用。(5)反应停可以通过降低CIA大鼠TNF-α、VEGF水平减轻症状。(6)反应停可以降低CIA大鼠滑膜组织VEGF表达，从而抑制血管翳的形成。(7)反应停治疗组大鼠踝关节病理积分在造模后14～60天显著低于CIA大鼠；放射学检查，骨破坏晚于CIA大鼠，说明反应停可以有效抑制或延缓CIA大鼠关节病理改变，减轻关节病变程度。(8)反应停可以抑制CIA大鼠的关节炎症程度，起效早于甲氨喋呤，远期疗效与甲氨喋呤无明显差异。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述：沙利度胺治疗风湿性疾病机制的研究进展

致谢

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