白芍总苷对佐剂性关节炎大鼠血浆及滑膜组织IL-1β、IFN-γ的影响

摘要

目的：类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性系统性自身免疫性疾病。以关节滑膜炎，对称性、破坏性关节病变为主要特征。病情逐步进展，最终导致关节功能障碍。其致病原因尚不完全明确，多种炎性细胞及细胞因子介导的异常细胞免疫、体液免疫而致的全身及关节局部免疫功能紊乱，在RA的致病过程中起着重要的作用。目前，改善症状、减慢疾病进展的抗风湿药是RA的主要治疗手段。但其毒副作用较大，而针对某些细胞因子的生物制剂价格昂贵，导致患者长期服用依从性差，不利于疾病控制，因此选择一种效价比良好的抗风湿药物势在必行。白芍总苷(totalglucosides of paeony，TGP)为中药制剂，自古以来就是风湿免疫性疾病治疗的重要组方之一。其作用温和，不仅具有抗炎、调节免疫力的作用，还具有镇痛，保肝的功效，已用于风湿性疾病的临床治疗，但其剂量及疗效不是很确切。本实验以完全弗氏佐剂所诱导的佐剂性关节炎(adiuvant arthritis，AA)大鼠模型为基础，从体重、关节肿胀程度、血浆及滑膜组织白细胞介素-1 β(interleukin-1β，IL-1 β)，干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)水平的变化等几方面，观察不同浓度的白芍总苷对关节炎的影响，探讨白芍总苷治疗RA的机制。 方法：(1)将成年雄性Wistar大鼠随机分为Ⅰ组(正常对照组)、Ⅱ组(单纯造模组)、Ⅲ组(造模+低剂量白芍总苷组)、Ⅳ组(造模+高剂量白芍总苷组)、Ⅴ组(造模+甲氨喋呤组)。Ⅱ-Ⅴ组每只大鼠尾根部皮内多点注射完全弗氏佐剂(CFA)0.2ml，诱导出关节炎模型，14天后再次注射0.1ml加强免疫。(2)从免疫后第12天开始Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组分别给予白芍总苷50mg/kg·d，300mg/kg·d，甲氨喋呤2.7mg/kg·w灌胃治疗，Ⅰ组、Ⅱ组给与等体积生理盐水灌胃。(3)测定不同时间点各组大鼠的体重、足体积、并进行关节炎指数(AI)的评定。(4)采用双抗体夹心ELISA法测定给药14天(造模26天)及给药28天(造模40天)各组大鼠血浆IL-1β、IFN-γ浓度。(5)对给药14天和给药28天的各组大鼠滑膜组织进行IL-1β、IFN-γ的SP免疫组织化学染色，采用真彩病理图像分析系统进行定量分析。(6)应用SPSS11.5统计软件进行统计分析。 结果：(1)AI：第Ⅱ-Ⅴ组大鼠造模15天后各时间点AI均高于第Ⅰ组，高峰出现在造模后20-25天，以后逐渐下降；Ⅲ组、Ⅳ组于造模后25天AI低于第Ⅱ组，Ⅴ组于造模后30天AI低于第Ⅱ组，具有统计学意义(P＜0.05)；Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组各时间点之间AI值无差别(P＞0.05)。(2)足体积的测量：实验前各组大鼠之间足体积无统计学差异(P＞0.05)。第Ⅱ-Ⅴ组大鼠足体积于造模后15天明显高于正常组(P＜0.05)，第20-25天达到肿胀高峰，之后肿胀程度逐渐下降，直到40天仍高于正常组(P＜0.05)。第Ⅲ组、Ⅳ组于造模后20天出现疗效，足体积低于第Ⅱ组，且具有统计学意义(P＜0.05)，较第Ⅴ组出现疗效早5天。第Ⅴ组于造模后25天出现疗效，与模型组比较有统计学意义(P＜0.05)。(3)血浆IL-1β、IFN-γ浓度：给药14天时，第II-V组两种细胞因子浓度均明显高于第I组，具有统计学意义(P＜0.05)；给药28天时，第II-V组的两种细胞因子浓度都较前下降，II组、III组仍高于正常(P＜0.05)，Ⅳ组、V组则降至正常，与正常组比较无统计学意义(P＞0.05)。给药14天及28天，III组、Ⅳ组、V组的两种细胞因子浓度均低于模型组(P＜0.05)。给药14天，III组、Ⅳ组、V组两两之间有统计学意义(P＜0.05)，以第Ⅳ组细胞因子浓度最低，其次为第III组，第V组最高；至给药28天，第Ⅳ组、V组细胞因子浓度最低，低于第III组(P＜0.05)，Ⅳ组、V组之间无差别(P＞0.05)。(4)滑膜组织IL-1 β、IFN-γ的积分光密度值(IOD)：给药14天时，第II-V组两种细胞因子的IOD值均明显高于正常对照组(P＜0.05)；至给药28天，II-V组细胞因子的IOD值都较前下降，但都未降至正常，与正常组比较仍有统计学意义(P＜0.05)。给药14天及28天两个时间点，III组、Ⅳ组、V组两种细胞因子的IOD值都低于模型组(P＜0.05)。给药14天，III组、Ⅳ组、V组两两之间有差别，以第Ⅳ组IOD值最低，其次为第III组，第V组最高；给药28天，第Ⅳ组、V组细胞因子水平低于第III组(P＜0.05)，Ⅳ组、V组之间无差别(P＞0.05)。(5)相关性分析：AI与足体积呈直线正相关；血浆中IL-1 β、IFN-γ浓度呈直线正相关，同时二者分别与足体积呈直线正相关；滑膜组织的IL-1 β、IFN-γ的IOD值呈直线正相关，同时二者分别与足体积呈直线正相关。结论：(1)AI与足体积呈直线正相关，二者均能反映关节肿胀情况，但后者方法更为精确、客观。二者结合能更直观、准确的反映关节肿胀程度。(2)血浆及滑膜中的IL-1β、IFN-γ水平分别与足体积呈直线正相关，提示IL-1β、IFN-γ在RA致病过程中发挥着重要的作用。(3)血浆及滑膜中的IL-1β、IFN-γ水平之间分别呈直线正相关，二者互相影响，在RA致病过程中形成相互影响的恶性循环。(4)白芍总苷具有较好的抗炎作用，可以降低血清IL-1 β、IFN-γ的含量，减轻症状。(5)白芍总苷可以降低滑膜IL-1β、IFN-γ的水平，减轻滑膜细胞水肿、减少炎性细胞浸润、抑制滑膜增生，从而达到减轻关节肿胀、抑制骨破坏、延缓病程的目的。(6)白芍总苷起效早于甲氨喋呤。药物治疗14天，白芍总苷疗效较甲氨喋呤为好；药物治疗28天，大剂量白芍总苷的疗效与甲氨喋呤无明显差异。

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附表

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结论

参考文献

综述 白芍总苷的研究进展

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