河北省HFRS疫区鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒的基因特征对应性研究

摘要

目的：对河北省肾综合征出血热（HFRS）疫区人感染和鼠携带汉坦病毒（HV）进行基因序列测定，通过DNASTAR软件对两者进行比较分析，阐明同一地区鼠携带HV与人感染HV二者的病原学特征及联系，为HFRS的防控提供科学依据。
　　 方法：
　　 1.通过流行病学调查，收集病人或疑似病人急性期血清标本；并在相同区域开展夹夜法捕鼠，无菌取鼠肺；
　　 2.采用间接免疫荧光法（IFA）筛选阳性血清标本，从中提取HV RNA；用冷冻切片机切鼠肺，冷丙酮固定后，IFA筛选HV阳性鼠肺；
　　 3.通过反转录套式聚合酶链反应（RT-nested PCR）扩增病毒核酸，进行基因分型；从阳性鼠肺中提取HV RNA，逆转录合成cDNA，根据已知HV标准毒株的基因序列设计SEO型和HTN型型特异性引物，用RT-nested PCR扩增，进行基因分型；
　　 4.选择代表性疫区血清标本以及相同地区鼠肺标本PCR扩增产物经纯化回收后进行序列测定；
　　 5.利用DNASTAR软件对人感染的HV及鼠携带的HV进行同源比较并构建系统发生树，并对同一地区人感染的HV及鼠携带的HV进行比较。
　　 结果：
　　 1.本实验共收集病人或疑似病人血清标本158份，经IFA检测阳性101份，阳性率为63.92％。对阳性血清标本进行RT-PCR扩增，得到17份阳性结果，阳性率为16.83％。
　　 2.对河北省HV阳性病人血清标本同时用SEO型和HTN型分型引物进行RT-nested PCR扩增，显示阳性标本所携带HV均为SEO型，未发现HTN型。
　　 3.本实验从1630份鼠肺中共获得阳性鼠肺43份，带毒率为2.64％。从全省各地鼠密度和带毒率分布情况看，我省HFRS疫源地带毒鼠主要以宅区褐家鼠为主，其次为宅区小家鼠，野外带毒鼠不是主要传染源。
　　 4.对阳性鼠肺标本总RNA同时用G1片段SEO型和HTN型分型引物分别进行扩增，显示阳性标本所携带HV均为SEO型，未发现HTN型。
　　 5.人感染HV与鼠携带HV的G1、G2片段基因变异分析
　　 5.1人感染HV与鼠携带HV的G1片段核苷酸同源性比较及基因变异情况
　　 全省各地整体的人感染HV与鼠携带HV的G1片段核苷酸同源性比较结果显示G1片段核苷酸序列同源性高达95.0％～99.7％。其中SJZ和ffTS为95.0％，CD2、BD1、BD2、BD3和ffSJZ，QHD2、TS和ffQHD，CZ1、CZ2和ffCZ都是99.7％，其余的为95.2％～99.4％之间。同一地区两种标本的分别为：保定为95.5％～96.4％，承德95.5％～96.6％，沧州为99.7％，秦皇岛为95.8％～99.7％，石家庄为95.2％，唐山为99.4％。其中核苷酸同源性最高的为沧州的CZ1和ffCZ，秦皇岛的QHD2和ffQHD都是99.7％，核苷酸同源性最低为保定的BD1和ffBD1以及承德的CD1和ffCD1，各为95.5％。提示无论是同一地区的鼠和人之间，还是不同地区的鼠和人之间，HV都是具有较高的同源性。
　　 5.2人感染HV与鼠携带HV的G2片段核苷酸同源性比较及基因变异情况
　　 从9份人血清和7份鼠肺中提取得标本两者之间G2片段核苷酸同源性高达92.7％～99.7％。其中CZ2和ffBD1之间的同源性为92.7％，CD2和ffCZ，BD3、BD1和ffSJZ，QHD和ffTS都分别为99.7％，其余的都在93.7％～99.3％之间。同一地区两种标本的分别为：保定为95.7％～98.7％，承德为98.7％～99.3％，沧州为97.3％～98.3％，石家庄为94.7％，唐山为99.3％。其中核苷酸同源性最高的为承德的CD2和ffCD1以及唐山的TS和ffTS都是99.3％，核苷酸同源性最低石家庄的SJZ和ffSJZ为94.7％。
　　 6.根据G1（217-573nt）和G2（2002-2301nt）片段用DNASTAR软件包构建系统进化树。G1片段构建的系统进化树显示QHD、ffQHD、TS、ffTS株亲缘关系接近。ffBD1，SJZ株亲缘关系接近， CZ1，ffCZ株亲缘关系较近。G2片段构建的系统进化树显示ffSJZ，BD1，BD3株亲缘关系接近， QHD2、TS、ffTS株亲缘关系接近，SJZ，ffBD1株亲缘关系接近，这与G1片断的比较一致，说明两地的同源性比较接近。其他序列同源性相对远些。
　　 7.基因分型及系统进化树分析表明，河北省是典型的SEO型疫区。其基因亚型根据G1、G2片段分为S1、S3二个亚型，分型结果一致，均以S3亚型为主，未发现新亚型。除承德一小家鼠所携带HV根据G1片段构建进化树分型为S4亚型， G1和G2片段的分型结果基本一致。
　　 结论：
　　 1.无论是同一区域，还是不同地区，河北省人感染HV与鼠携带HV高度同源，褐家鼠携带的HV是HFRS病人感染的最主要来源。
　　 2.河北省人感染HV以SEO型为主，共包括S1、S3两个亚型，以S3亚型为主。疫源地宿主动物所携带的HV基因型以SEO型为主，基因亚型以S3亚型为主，且在河北省广泛分布。
　　 3.在地理位置相近的地区，病毒基因组核苷酸序列同源性相对较高，系统进化关系较近，HV的分布具有一定的地理区域性。

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综述肾综合征出血热疫苗的研究进展

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