三七总皂甙(PNS)对于四环素诱导的兔胸膜腔粘连及纤维化的影响

摘要

目的:胸膜腔给予四环素建立兔胸膜粘连及纤维化模型,观察胸膜腔内给予三七总皂苷(PNS)后胸膜腔积液特征(葡萄糖、白细胞、乳酸脱氢酶、蛋白)、胸腔积液引流量的变化;通过酶联标记吸附试验(ELASA)检测胸腔积液中生长转化因子(TGF)-β、血管通透因子(VEGF)的变化;14天处死动物打开胸膜腔,观察胸膜腔粘连情况,评定胸膜粘连积分,取材兔胸膜组织做HE、Masson染色,观察胸膜厚度、胶原沉积情况,以此来评定PNS对四环素诱导的兔胸膜粘连及纤维化的影响,探索治疗胸膜粘连及纤维化的新药物。
　　 方法:60只新西兰白兔(雌雄各半,体重2.5～3.0 Kg)随机分为6组,分别为对照组,模型组,PNS低、中、高剂量组、尿激酶组,每组10只。所有动物均与右胸膜腔放置胸腔积液引流管。对照组每只动物通过胸腔引流管给予生理盐水3.0 ml,其余各组每只动物均给与四环素盐酸盐溶液35 mg/kg,12小时之后对照组仍给予生理盐水3.0 ml,PNS低、中、高剂量组每只动物分别给予PNS20 mg/kg、40mg/kg、80 mg/kg,尿激酶组给予尿激酶剂量1500IU/只,每隔12小时一次,直至96小时拔出引流管为止,共给药8次。给药前分别于24、48、72、96小时通过引流管抽取胸腔积液,记录其量、性状并留适量作生化检测和酶联免疫吸附试验。实验期间,所有动物均自由饮水,摄食。14天时处死所有动物,打开胸膜腔,观察并记录每组动物胸膜粘连积分情况;取胸膜组织固定、包埋、切片、作HE、Masson染色,用于镜下观察。
　　 结果:
　　 1.四环素诱导的兔胸膜腔粘连及纤维化模型
　　 模型组10只动物中8只完成实验,2只死于血胸;PNS低剂量组10只动物中9只完成实验,1只咬断引流管,气胸致死;PNS高剂量组10只动物中9只完成实验,1只引流管脱落,怀疑气胸致死;尿激酶组10只动物中9只完成实验,1只不明原因死亡;对照组和PNS中剂量组10只均完成实验。
　　 2.胸腔积液引流量
　　 24小时胸腔积液引流量各组间无明显差异(除外对照组),模型组有两例胸液呈血性,尿激酶组有两例胸液淡粉色,其余均为淡黄色。48小时模型组两例血性胸液颜色变浅,尿激酶组两例粉红色胸液转为淡黄色。其余没有变化。48,72小时,96小时胸腔积液引流量各组间差异有显著性,PNS高剂量组,尿激酶组引流量均低于其它各组。PNS高剂量组胸腔积液引流量48小时达高峰并且低于同时刻其它各组胸液引流量,其余各组72小时引流量达高峰,此后逐渐降低。
　　 3.胸腔积液生化特征
　　 3.1蛋白质含量:各组胸腔积液中蛋白质含量随时间推移都呈下降趋势,24小时各组比较差异无统计学意义。48小时,PNS高剂量组与其它组比较差异具有显著性(P＜0.05),明显低于其它组。72小时,96小时PNS高剂量组、尿激酶组胸液中蛋白质含量明显降低,与同时间其它各组比较差异有显著性(P＜0.05)。
　　 3.2白细胞数值:24、48小时各组间胸液中白细胞数值无统计学意义,72、96小时PNS高剂量组与同时刻各组比较差异具有显著性(P＜0.05),明显低于其它组。随时间推移,各组白细胞均呈下降趋势
　　 3.3乳酸脱氢酶(LDH)含量:胸液中LDH含量在同一时间段各组间比较无显著性差异,同一组不同时间段比较显示,随时间变化逐渐降低。
　　 3.4葡萄糖含量:随时间推移各组胸腔积液中葡萄糖含量有逐步增高现象。48小时PNS高剂量组明显高于其它组。
　　 4细胞因子含量
　　 4.1转化生长因子(TGF-β)含量:24小时、48小时PNS高剂量组胸液TGF-β含量明显低于其它四组,有显著性差异(P＜0.05),72、96小时PNS高剂量组和尿激酶组与其它三组比较TGF-β含量也明显偏低,有显著性差异(P＜0.05)。同一组不同时间段比较:模型组和PNS低剂量组48小时后胸腔积液中TGF-β含量迅速升高,而其它三组也同样有升高趋势但曲线变化较为平缓。
　　 4.2血管通透性因子(VEGF)含量:在各同时刻点PNS高剂量组胸液中VEGF含量低于其它各组,差异有统计学意义。除PNS低剂量组胸液VEGF含量在72小时达高峰外,其余各组胸液VEGF含量均在48时达最高值,此后逐渐下降。
　　 5胸膜腔情况和胸膜粘连积分
　　 5.1胸膜腔情况:大体观察对照组右侧胸膜腔:胸膜光滑、无粘连,模型组、低、中剂量PNS组:胸膜粘连广泛,形成多个粘连带,有1例出现血胸,PNS高剂量组、尿激酶组:胸膜间有少许粘连带出现。
　　 5.2胸膜粘连积分:PNS高剂量组和尿激酶组胸膜粘连积分均低于其余各组,分别为(1.56±0.53)、(1.44±0.53),差异有统计学意义。
　　 6胸膜病理情况
　　 6.1镜下观察所见:对照组HE染色可见胸膜很薄,间皮细胞为扁平状,结缔组织中炎细胞、成纤维细胞不明显;Masson染色未见或仅有极少量胶原。模型组、低、中剂量PNS组HE染色可见胸膜均较厚,间皮下有大量炎细胞,成纤维细胞。表面间皮细胞可见呈立方形偶见脱落;Masson染色可见间皮下增厚的结缔组织呈现蓝绿色,存在大量胶原纤维。PNS高剂量组和尿激酶组HE染色可见胸膜厚度比上述三组有所降低,炎细胞、成纤维细胞有所减少。Masson染色可见间皮下的结缔组织蓝绿色较前述三组颜色变浅,提示胶原纤维减少。
　　 6.2胸膜厚度:PNS高剂量组和尿激酶组胸膜厚度为:(71.22±33.02)μm、(100.00±57.01)μm,与其余组比胸膜厚度明显偏低,差异有显著性(P＜0.001)。
　　 6.3成纤维细胞数:PNS高剂量组和尿激酶组胸膜中成纤维细胞数分别为(93.33±25.29)/mm2、(113.55±35.87)/mm2,与其余组比差异有统计学意义(P＜0.001)。
　　 结论:
　　 135mg/kg四环素盐酸盐注入兔胸腔可诱导产生明显的胸膜粘连及纤维化,为研究三七总皂苷成功复制动物模型。
　　 2三七总皂苷可降低胸液量,减少胸水中TGF-β,VEGF的产生,减少成纤维细胞数量,抑制胶原产生,有效减轻胸膜粘连及肥厚。
　　 380 mg/kg的三七总皂苷注入兔胸膜腔可有效抑制四环素诱导的胸膜粘连及纤维化,未见明显不良反应。与尿激酶1500IU/只相比治疗效果无显著差异,而40mg/kg、20mg/kg的三七总皂苷则无明显治疗作用。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 胸膜粘连及纤维化与三七总皂苷

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