人脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞对1型糖尿病大鼠血糖及体重的影响

摘要

目的：前期实验利用胰岛细胞生存的微环境已经将人脐带Wharton'sJelly中间充质干细胞(hUC-MSCs)诱导分化为具有胰岛素分泌功能的胰岛样细胞，但是这些诱导分化的胰岛样细胞在体内的功能如何尚不确定。本实验旨在观察hUC-MSCs诱导分化的胰岛样细胞对1型糖尿病大鼠血糖及体重的影响。
　　 方法：
　　 1采用组织块贴壁法分离培养hUC-MSCs；
　　 2利用胶原酶v分次消化大鼠胰岛细胞；
　　 3应用Transwell板将hUC-MSCs与大鼠胰岛细胞共培养，利用胰岛细胞生存的微环境将hUC-MSCs向胰岛样细胞诱导分化，倒置显微镜下观察细胞形态变化；
　　 4将SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作1型糖尿病大鼠模型，随机血糖连续3次＞16.7mmol/L定为糖尿病大鼠造模成功。将造模成功的糖尿病大鼠随机分为两组：STZ实验组（糖尿病大鼠肾被膜下移植诱导后的胰岛样细胞）和STZ对照组（糖尿病大鼠不做任何处理）；
　　 5在移植前应用Brdu对诱导后的胰岛样细胞进行标记；
　　 6将Brdu标记后的胰岛样细胞移植到STZ实验组糖尿病大鼠的肾被膜下，观察大鼠血糖、体重的变化，8周后结束实验。
　　 7实验结束时将大鼠的胰腺和肾脏摘除，胰腺行HE染色，肾脏行HE染色和免疫组化染色。
　　 结果：
　　 1腹腔注射STZ后大鼠的血糖明显升高，出现多尿、多饮、体重增加缓慢甚至降低，皮毛颜色暗淡，有脱毛现象。随机血糖连续3次＞16.7mmol/L定为糖尿病大鼠造模成功，造模成功率为100％。
　　 2在250倍镜下随机选取10个视野计数阳性细胞数与非阳性细胞数，计算Brdu阳性率=阳性细胞数/（阳性细胞数+非阳性细胞数），得出Brdu的标记率为92％。
　　 3在实验过程中，STZ实验组有5只大鼠死亡（2只死于手术，3只死于高血糖），STZ对照组有8只大鼠死亡（均死于高血糖），最后进行统计分析的共17只（正常对照组6只，STZ实验组7只，STZ对照组4只）。
　　 4大鼠血糖的变化细胞移植后8周，STZ实验组的血糖较移植前下降，差异具有统计学意义(p＜0.05)。STZ对照组和正常对照组的血糖与移植前比较无明显差异(p＞0.05)。STZ实验组的血糖移植前为(29.00±3.68)mmol/L，移植后为(20.31±1.70)mmol/L;STZ对照组的血糖实验前为(27.87±2.28)mmol/L，实验后为(28.23±1.89)mmol/L;正常对照组的血糖实验前为(6.70±0.25)mmol/L，实验后为(6.58±0.66)mmol/L。
　　 5大鼠体重的变化细胞移植后8周，三组大鼠的体重较移植前均增加，差异均具有统计学意义(p＜0.05)。正常对照组增加的最多，STZ实验组次之，STZ对照组增加的最少，差异具有统计学意义(p＜0.05)。STZ实验组的体重移植前为(219.33±16.58)g，移植后为(323.14±28.33)g；STZ对照组的体重实验前为(207.25±13.63)g，实验后为(246.00±27.54)g；正常对照组的体重实验前为(275.33±28.49)g，实验后为(496.50±20.51)g。
　　 6胰腺HE染色示：正常对照组大鼠的胰腺内散在分布大小不等、形状规则的胰岛，胰岛的结构清晰。STZ对照组糖尿病大鼠的胰岛数量明显减少，形状不规则，萎缩胰岛周围腺泡细胞肥大。胰腺间质大动脉收缩状，内皮细胞突向管腔，动脉壁增厚，动脉周围纤维组织增生，可见神经纤维束。胰腺小叶萎缩，腺泡腔明显，间质淋巴细胞浸润。STZ实验组大鼠的胰腺组织与STZ对照组有相似的改变，无自发恢复现象。
　　 7肾脏HE染色示：正常对照组和STZ对照组大鼠的肾被膜边缘完整，形态清楚。STZ实验组大鼠在移植细胞的部位肾被膜和肾皮质之间有大量的细胞，部分肾被膜出现断裂现象。
　　 8肾脏免疫组化染色示：正常对照组和STZ对照组大鼠的肾被膜下无胰岛素、Brdu染色阳性的细胞。STZ实验组大鼠在移植细胞的部位肾

目录

文摘

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人脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞对1型糖尿病大鼠血糖及体重的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 干细胞移植——糖尿病细胞治疗的新途径

参考文献

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