多巴胺受体在利多卡因中毒惊厥过程中的作用

摘要

目的：应用盐酸利多卡因致大鼠中毒惊厥模型，观察中毒惊厥过程中大鼠海马多巴胺(DA)含量的变化，并应用多巴胺D1受体激动剂SKF38393和D2受体激动剂培高丽特(pergolide)，观察多巴胺D1和D2受体含量变化，探讨多巴胺受体在利多卡因致大鼠中毒惊厥过程中的作用机制。
　　 方法：
　　 1.实验分组及动物模型的制备健康雄性Wistar大鼠24只，体重250±20g(河北医科大学实验动物中心提供)。随机均分为四组：对照组（S组），利多卡因组（L组），利多卡因+SKF组(LS组)，利多卡因+培高丽特组（LP组）。
　　 大鼠腹腔注射10％水合氯醛350mg/kg麻醉后，于尾静脉穿刺置24号套管针，接肝素帽并贴好敷贴备用。24小时清醒后，将连有延长管的注射器与尾静脉相连，持续泵入研究用药，按照实验分组给予不同的处理：S组：生理盐水以3m1/h的速度经尾静脉持续泵入；L组：持续静注2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到出现全身不自主或不协调的抽搐时停止泵入局麻药，然后经尾静脉输注3m1/h生理盐水；LS组：以10mg/kg腹腔注射SKF38393，于一小时后经尾静脉持续注入2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到出现抽搐时停止泵入局麻药，然后经尾静脉输注3m1/h生理盐水；LP组：经腹腔注射1mg/kg培高丽特，于一小时后经尾静脉持续注入2％利多卡因4mg·kg-1·min-1，直到惊厥时停止注药，然后经尾静脉输注3ml/h生理盐水。记录利多卡因致惊厥的剂量及惊厥持续时间。
　　 2.标本的处理
　　 惊厥后10分钟大鼠深麻醉下快速断头处死大鼠，打开颅腔，取出脑组织，冷生理盐水冲洗。保留半侧脑组织和取另一侧海马。
　　 将脑组织放入4％的多聚甲醛后，常规脱水、浸蜡、包埋，4μm厚连续冠状切片。多巴胺受体免疫组化测定按照EliVision puls免疫组化染色试剂盒进行。光镜下(10×40)计数5个视野的棕黄色阳性细胞数量，计算出平均数和标准差，数据以(x)±s表示，采用SPSS13.0软件进行单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。
　　 将另一侧海马取出后迅速放入液氮中冷冻待测。测量时以5％生理盐水作均浆介质，研磨成10％的组织均浆，以3000r4nin离心20min，取上清液待测。用ELISA法测定海马组织匀浆中多巴胺含量。
　　 3.多巴胺含量的测量双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)方法为将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠DA单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B底物(TMB)在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠DA浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠DA含量。
　　 结果：
　　 1.各组之间大鼠体重比较无统计学意义。
　　 2.各组惊厥发生时间比较除S组外，各组均出现了惊厥。L组、LS组和LP组从泵入利多卡因到出现惊厥的时间(min)分别为：16.011±0.803、10.833±1.605和19.581±1.361。与L组相比，LS组出现惊厥时间明显缩短(P<0.05)；而LP组则相反，出现惊厥时间明显延长（P<0.05）。
　　 3.各组间海马CA1区多巴胺D1、D2受体阳性表达的比较S组、L组、LS组和LP组海马CA1区D1受体阳性细胞数（个/HP）分别为：45±5、25±2、38±2和29±2;D2受体阳性细胞数（个/HP）分别为：41±3、50±2、48±3和59±3。
　　 与S组相比，L组，LS组和LP组的多巴胺D1受体阳性细胞数均减少，D2受体阳性细胞数均增加(P<0.05)。与L组相比，LS组D1受体阳性细胞数增加(P<0.05)，D2受体阳性细胞数无显著差异(P>0.05)；LP组D2受体阳性细胞数增加(P<0.05)，D1受体阳性细胞数无显著差异（P>0.05）。
　　 4.各组间海马DA含量的比较S组、L组、LP组和LS组的DA含量(ng/L)分别是：53.325±3.690、66.338±2.205、78.828±2.042和81.931±2.701。
　　 与S组比较，各组多巴胺含量均增加(P<0.05)。与L组比较，LS组与LP组多巴胺含量均增加(P<0.05)。LS组多巴胺含量与LP组比较无显著性差异(P>0.05)。
　　 结论：利多卡因致大鼠中毒惊厥过程中，海马CA1区多巴胺D1受体活性表达减少，D2受体活性表达增加。多巴胺D1受体对局麻药中毒惊厥有促进作用，D2受体有抑制作用。

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多巴胺受体在利多卡因致大鼠惊厥过程中的作用

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结果

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综述 局麻药中毒预防和治疗的进展

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