自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心功能不全家免炎性因子表达的影响

摘要

背景：急性心肌梗死(AMI)往往伴随强烈的免疫炎症反应，是损伤部位修复机制的重要调控因素之一；但免疫炎症反应过度的激活将导致心肌细胞的进一步损伤，推动心室重塑的发生和发展，免疫炎症反应在心肌梗死病理生理进程中起着双重的调节作用。近来研究表明，骨髓间充质干细胞(BMSCs)具有对免疫炎症反应的调节作用，移植到梗死心肌后可以调节受体的免疫炎症反应，进而延缓心肌梗死后心室重塑的进展。
　　 目的：研究BMSCs移植对心肌梗死后心功能不全家兔核因子-κB（NF-κB）及炎性因子(IL-6、TNF-α、CRP)的影响；以及探讨BMSCs移植后减轻炎症反应，从而改善心肌重塑的可能机理；及评价BMSCs移植治疗心梗后心功能不全的有效性，为临床防治AMI后患者心肌重塑和治疗心功能不全提供安全、有效的方法。
　　 方法：本研究以新西兰白兔为研究对象，随机分为：对照组（假手术组）、AMI后心功能不全模型组(开胸结扎冠脉LAD)、BMSCs组（开胸结扎冠脉LAD+BMSCs移植）。
　　 1、开胸结扎冠状动脉前降支(LAD)中段建立兔AMI后心功能不全动物模型。
　　 2、采用密度梯度离心法分离BMSCs，经贴壁法分离和培养BMSCs，经5-氮胞苷诱导后利用DAPI进行细胞标记。
　　 3、透射电镜观察经5-氮胞苷诱导28天后的BMSCs向心肌细胞的分化。
　　 4、在急性心肌梗死后14天时，开胸移植自体BMSCs。
　　 5、心功能的评价：分别于心梗手术前、心梗手术后7天和干细胞移植后28天时进行心脏超声检查，观察心功能的情况。
　　 6、血清炎性因子测定：分别于术前、术后7天、细胞移植后28天经耳缘静脉抽血，采用ELISA法检测血清IL-6、TNF-α、CRP及MMP-9的浓度，观察炎性因子的变化情况。
　　 7、采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法，于干细胞移植后28天检测心肌组织NF-κB、IL-6、TNF-α及MMP-9的mRNA表达。
　　 结果：
　　 1、BMSCs的体外分离和培养：抽取的骨髓经分离液离心后，可看到分离液和血浆之间的BM-MNC层。通过在培养瓶中贴壁和换液纯化获得BMSCs，培养72h后可见散落的BMSCs贴壁生长，4～7天后BMSCs快速增殖，集落群逐渐增大，11～14天细胞集落间出现大片融合，最后铺满大部分瓶底。大部分BMSCs呈长梭形，胞核较大。当集落达80％～90％融合时进行消化传代，传代培养3～5天开始汇合，继续传代扩增。第10代以后的BMSCs增长速度明显减慢。
　　 2、急性心肌梗死后心功能不全家兔模型的建立：34只新西兰白兔完成了手术，处死前有24只成活。其中对照组8只全部存活；AMI后心功能不全模型组存活8只，死亡4只；BMSCs组存活8只，死亡6只。
　　 术前各组的左室舒张末内径（LVEDD）、左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率（LVFS）均无统计学差异。AMI后心功能不全模型制作后7天，BMSCs组、AMI后心功能不全模型组的EF值比正常对照组降低，差别有统计学意义。AMI后心功能不全模型组、BMSCs组的组间EF值差异无统计学意义。
　　 3、自体BMSCs移植对急性心肌梗死后心功能的影响：细胞移植后28天，正常对照组、BMSCs组EDD均明显低于AMI后心功能不全模型组，EF及FS均明显高于AMI后心功能不全模型组，差异具有统计学意义。
　　 4、血清炎性因子检测结果：正常对照组、BMSCs组和AMI后心功能不全模型组的血清IL-6、TNF-α、CRP及MMP-9浓度在手术前无统计学差异。手术后7天，与正常对照组相比BMSCs组、AMI后心功能不全模型组的血清IL-6、TNF-α、CRP及MMP-9的浓度均显著增加，差异有统计学意义；BMSCs组和AMI后心功能不全模型组差异无统计学意义。细胞移植后28天，正常对照组、BMSCs组的血清IL-6、TNF-α、CRP及MMP-9的浓度比AMI后心功能不全模型组显著降低，差异有统计学意义。
　　 5、心肌组织NF-κB、IL-6、TNF-α及MMP-9的mRNA表达变化：正常组、BMSCs组NF-κB、TNF-α、IL-6及MMP-9的mRNA表达比AMI后心功能不全模型组显著降低，差异具有统计学意义。
　　 6、心功能与炎性因子的相关性：细胞移植后28天时，EF与血清炎性因子呈负相关;与心肌组织炎性因子呈负相关;与心肌组织NF-κB呈负相关。其中Y代表LVEF值，X代表各个炎性因子。
　　 结论：
　　 1、自体BMSCs移植可显著降低心肌梗死后炎症反应及NF-κB表达。
　　 2、自体BMSCs移植可通过减轻心梗后免疫炎症反应抑制心室重塑的进展，从而达到改善心功能的作用。
　　 3、采用密度梯度离心法及贴壁法获得BMSCs，采用5-氮胞苷诱导，经DAPI标记，成功地获得标记的干细胞。

目录

文摘

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自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心功能不全家兔炎性因子表达的影响

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材料与方法

结果

附图

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讨论

结论

参考文献

综述 骨髓间充质干细胞移植调节心肌梗死后炎症反应的研究现状

参考文献

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