甘露糖结合凝集素对甲状腺癌细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达影响的研究

摘要

目的:用不同浓度的甘露糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)分别作用于甲状腺乳头状癌细胞(K1)和甲状腺滤泡状癌细胞(FTC-133),采用4-甲基偶氮四唑蓝(MTT法)检测细胞增殖,选择适量的浓度及作用时间,应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞凋亡,蛋白印记法(Western blot)检测两种癌细胞中Bcl-2和p53蛋白表达,探讨MBL与甲状腺肿瘤细胞增殖、凋亡的关系,为MBL用于防治甲状腺肿瘤提供理论依据。
　　 方法:
　　 1：细胞培养:人甲状腺乳头状癌(K1)和甲状腺滤泡状癌(FTC-133)细胞,分别培养于含有10％胎牛血清,100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素、DMEM:F12:MCDB105(2:1:1)和DMEM-F12(1:1)的培养基中,37℃、5％CO2培养箱培养,2～3天换液1次。用0.25％胰酶常规消化传代,取对数生长期细胞进行实验。
　　 2：MTT法检测细胞增殖:分别将甲状腺乳头状癌细胞(K1)、甲状腺滤泡状癌细胞(FTC-133)与不同浓度的MBU(浓度分别为0、0.01、0.1、1、10ug/ml,每个浓度设5个复孔,0ug/LMBL为对照组)共培养12、24、48h后,MTT细胞增殖试验检测MBL对两种细胞生长的影响。
　　 3：流式细胞术检测细胞凋亡率:将甲状腺乳头状癌细胞(K1)和甲状腺滤泡状癌细胞(FTC-133)分别与0、1ug/mlMBL共培养48h后,流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法观察MBL对两种甲状腺癌细胞凋亡的影响。
　　 4：Bcl-2及p53基因蛋白表达的测定:提取实验组与对照组细胞中的总蛋白,以β-actin作为内参,蛋白印记法(Western blot)测定1ug/mlMBL分别作用于甲状腺乳头状癌细胞(K1)和甲状腺滤泡状癌细胞(FTC-133)48h后,Bcl-2及p53基因蛋白的相对表达量。
　　 结果:
　　 1：MTT法检测结果:MBL作用于甲状腺乳头状癌及甲状腺滤泡状癌细胞后,各组细胞生长均受到抑制,并呈剂量、时间依赖关系。
　　 2：流式细胞术检测细胞凋亡率:MBL作用于甲状腺乳头状癌(FTC-133)及甲状腺滤泡状癌细胞(K1),检测到明显的凋亡峰,1ug/ml的MBL作用48h后甲状腺乳头状癌细胞(FTC-133)凋亡率为(12.87±0.47)％,而未经MBL作用的对照组凋亡率为(5.15±0.52)％,二者差异具有统计学意义(p＜0.05)。1ug/ml的MBL作用48h后甲状腺滤泡状癌细胞(K1)凋亡率为(9.36±0.35)％,而未经MBL作用的对照组凋亡率为(3.24±0.71)％,二者差异具有统计学意义(p＜0.05)。
　　 3：Bcl-2及p53基因蛋白表达的测定；
　　 3.1：Bcl-2蛋白的相对表达量；
　　 3.1.1：甲状腺乳头状癌细胞(K1):Western blot结果显示26KD处有一个条带,密度扫描分析结果对照组为:(1.20±0.07),实验组为:(0.59±0.04),实验组与对照组相比Bcl-2蛋白相对表达量明显下调,差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　 3.1.2：甲状腺滤泡状癌细胞(FTC-133):Western blot结果显示26KD处有一个条带,密度扫描分析结果对照组为:(1.07±0.11),实验组为:(0.33±0.06),实验组与对照组相比Bcl-2蛋白相对表达量明显下调,差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　 3.2：p53蛋白的相对表达量；
　　 3.2.1：甲状腺乳头状癌细胞(K1):Western blot结果显示53KD处有一个条带,密度扫描分析结果对照组为:(1.51±0.29),实验组为:(0.74±0.07),实验组与对照组相比p53蛋白相对表达量明显下调,差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　 3.2.2：甲状腺滤泡状癌(FTC-133):Western blot结果显示53KD处有一个条带,密度扫描分析结果对照组为:(0.88±0.14),实验组为:(0.35±0.08),实验组与对照组相比p53蛋白相对表达量明显下调,差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 1：MBL在体外具有抑制甲状腺乳头状癌细胞及甲状腺滤泡状癌细胞增殖的作用,这种作用与剂量、时间呈正相关。
　　 2：MBL在体外可促进甲状腺乳头状癌细胞及甲状腺滤泡状癌细胞凋亡,为以后MBL用于甲状腺癌防治提供理论基础。
　　 3：MBL可诱导甲状腺癌细胞凋亡、抑制其增殖,在其诱导甲状腺癌细胞凋亡、促进其增殖的的过程中,Bcl-2和p53可能发挥着一定的作用。

目录

文摘

英文文摘

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 甘露糖结合凝集素和肿瘤关系的研究进展

致谢

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