奥美拉唑对奥拉西坦在大鼠和人体内的药动学影响

摘要

本文分析了奥美拉唑对奥拉西坦在大鼠和人体内的药动学的影响。本研究分为三个部分：
　　第一部分：奥美拉唑对奥拉西坦在大鼠体内药动学的影响。
　　目的：近年来国内外关于奥拉西坦药代动力学的研究较少，已报道的血清奥拉西坦浓度测定方法，其流动相配制复杂，血浆样品处理操作繁琐，成本较高。本研究拟建立大鼠血浆中奥拉西坦浓度的HPLC检测方法，为奥拉西坦大鼠体内的药动学研究提供方法学保证。奥拉西坦在体内分布广泛，主要以肾脏、肝脏和肺内的浓度最高，但是至今还没有研究报道奥拉西坦的代谢途径。本实验以质子泵抑制剂奥美拉唑(omeprazole)作为肝微粒体酶CYP2C19的探针药物，探讨奥美拉唑对奥拉西坦在大鼠体内药动学的影响，从而确定奥拉西坦是否为肝微粒体酶CYP2C19的底物，为奥拉西坦临床合理应用提供参考依据。
　　方法：色谱条件：色谱柱为Symmetry shiedTM RP18柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈：水(3.2:96.8，V/V)，流速为0.8 mL·min-1，检测波长为210 nm，柱温为40℃，进样量为20μL。通过对线性范围、最低检出浓度、回收率、精密度和样品稳定性的确定，进一步对方法学进行评价。健康SD大鼠16只，随机分为对照组(奥拉西坦组)和实验组(奥美拉唑+奥拉西坦组)，每组8只。对照组每天2次灌胃蒸馏水，实验组每天2次灌胃奥美拉唑溶液，持续共7d后两组大鼠一次性灌胃奥拉西坦溶液，于给药后不同时间眼内眦取血。应用HPLC法测定与奥美拉唑合用前后大鼠体内奥拉西坦的血药浓度，以DAS2.1.1药物动力学程序拟合药动学参数，采用SPSS13.1软件进行统计学分析。
　　结果：奥拉西坦的保留时间为3.6min；标准曲线方程为Y＝13041X-16156，r2=0.9997(n=7)，线性范围2～100mg·L-1；低(5 mg·L-1)、中(20 mg·L-1)、高(60 mg·L-1)三种浓度模拟血浆样品的绝对回收率分别为(91.1±5.17)%、(97.9±3.22)％和(98.41.99)％，方法回收率分别为(96.35±3.01)%、(101.4±3.41)%和(102.2±1.37)%；日内精密度RSD分别为2.86%、4.38%和3.54%，日间精密度RSD分别为3.25%、3.17%和3.14%；奥拉西坦血浆样品-40℃保存30天及反复冻融3次后性质稳定，处理血浆样品放置4h对测定无影响。合用奥美拉唑前后，奥拉西坦的药动学参数AUC(0-t)，AUC(0-∞)，Tmax，Cmax，t1/2，CL/F和V/F没有显著性变化。
　　结论：所建立HPLC测定方法简便、准确、灵敏度高、重现性好，适用于大鼠血浆中奥拉西坦浓度的测定。合用奥美拉唑前后，奥拉西坦的药动学参数没有显著性变化。因此认为奥美拉唑对奥拉西坦在大鼠体内药代动力学无显著性影响，初步推断奥拉西坦不是肝微粒体酶CYP2C19的底物。
　　第二部分：奥美拉唑对奥拉西坦在人体内药动学的影响。
　　目的：本实验的第二部分拟建立人血浆中奥拉西坦的HPLC测定方法，探讨奥美拉唑对奥拉西坦在人体内药动学的影响，从而进一步确定奥拉西坦是否为肝微粒体酶CYP2C19的底物，为奥拉西坦代谢途径的研究提供参考依据。
　　方法：色谱条件：色谱柱为Symmetry shiedTM RP18柱(4.6 mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈：水(3.2:96.8，V/V)，流速为0.8 mL·min-1，检测波长为210 nm，柱温为40℃，进样量为20μL，内标为阿昔洛韦。通过对线性范围、最低检出浓度、回收率、精密度和样品稳定性的确定，进一步对方法学进行评价。8名健康志愿者随机分成两组，实验组和对照组各4人。实验组前6天不服药，第7天早上空腹口服奥拉西坦胶囊1600mg；对照组每天口服奥美拉唑钠肠溶片20mg，连服6天达稳态，第7天早上空腹给予奥美拉唑钠肠溶片20mg后1h给予奥拉西坦胶囊1600mg，两组健康志愿者于给药后0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12 h前臂静脉取血3ml，置肝素钠抗凝的离心管中，3000 r·min-1离心5 min，取上层血浆，-40℃低温保存。两周洗脱期后进行交叉试验。应用HPLC法测定与奥美拉唑合用前后健康受试者体内奥拉西坦的血药浓度，以DAS2.1.1药物动力学程序拟合药动学参数，以SPSS13.1软件进行统计学分析。
　　结果：标准曲线方程为Y＝0.037X+0.0221，r2=0.9995(n=7)，线性范围1～40mg·L-1。低、中、高三种不同浓度模拟血浆样品的绝对回收率分别为(102.3±17.58)%、(93.93±5.29)%和(93.53±3.80)%；方法回收率分别为(97.37±6.60)%、(96.91±2.50)％和(100.5±4.40)%。内标提取回收率为(97.66±4.04)%。日内精密度的RSD值分别为7.17％、3.21%和4.02％，日间精密度的RSD值分别为5.23%、2.15%和1.95%。奥拉西坦血浆样品-40℃保存30d及反复冻融3次后性质稳定，血浆样品处理后放置4h对测定无影响。合用奥美拉唑前后，奥拉西坦的药动学参数AUC(0-t)，AUC(0-∞)，MRT(0-t)，MRT(0-∞)，Tmax，Cmax，t1/2，CL/F和V/F均没有显著性变化。
　　结论：HPLC法测定人血浆中奥拉西坦浓度，方法简便、准确，灵敏度高，重现性好；奥美拉唑与奥拉西坦合用后，对奥拉西坦人体内药代动力学无显著性影响，初步推断奥拉西坦不是经由CYP2C19代谢。
　　第三部分：HPLC法测定人尿中奥拉西坦的浓度。
　　目的：建立HPLC法测定人尿中奥拉西坦浓度的方法，同时测定人尿中奥拉西坦的浓度，为奥拉西坦代谢途径的研究提供参考依据。
　　方法：以阿昔洛韦为内标，色谱柱：Symmetry shiedTM RP18柱(4.6mm×250 mm，5μm)，流动相为乙腈：水(5:95，V/V)，流速为0.6mL·min-1，检测波长为210 nm，柱温为40℃，进样量为20μL。通过对线性范围、最低检出浓度、回收率、精密度和样品稳定性的确定，进一步对方法学进行评价。健康志愿者8人，试验前禁食12h后口服奥拉西坦胶囊1600mg。用药2h后自由饮水，收集给药后12h和24h尿液，采用高效液相色谱法测定其血药浓度。
　　结果：奥拉西坦和阿昔洛韦保留时间分别为5.4min和8.6min；标准曲线方程为：Y=0.0008X+0.0027，r2=0.999(n=7)，线性范围20～2400mg·L-1；低(100 mg·L-1)、中(300 mg·L-1)、高(1200 mg·L-1)三种浓度尿液样品的绝对回收率分别为(90.38±4.93)%、(93.71±3.54)%和(95.04±2.31)%，方法回收率分别为(98.32±1.96)%、(105.0±1.74)%和(103.4±2.43)%，内标回收率为(96.10±1.29)%。日内精密度RSD分别为3.40%、4.76%和1.04%，日间精密度RSD分别为2.82％、3.64％和1.90%；奥拉西坦尿液样品-40℃保存30d及反复冻融3次后性质稳定，处理尿液样品放置4h对测定无影响。
　　结论：本实验建立了测定人尿中奥拉西坦浓度的HPLC分析方法，该方法简便、准确，灵敏度高，重现性好；试验数据显示口服奥拉西坦胶囊(1600mg)在人体内12h尿中排出原形药29.91%，24h尿中排出32.89%。