基于液质联用与质谱库检索技术的前期胡化学成分分析

摘要

前胡为伞形科前胡属白花前胡（PeucedanumpraeruptorumDunn）的干燥根，为临床常用中药。《中国药典》记载前胡具有降气化痰、散风清热等功效，可用于痰热喘满，咳痰黄稠，风热咳嗽痰多等症。研究表明，香豆素为前胡的主要化学成分，但由于前胡中成分复杂且部分成分含量较低，目前为止，对前胡中香豆素成分的研究仅限于少数几种成分。高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）具有快速准确、灵敏、专属等优点，是复杂基质中化学成分定量和定性分析的有力工具。本研究即采用HPLC-MS技术对前胡中的香豆素成分进行分析。在总结3'，4'-二酰氧基取代开洛酮类香豆素化合物电喷雾质谱裂解规律的基础上，采用HPLC-MS技术对前胡中该类香豆素成分进行定性分析;建立香豆素质谱图库，通过质谱库检索结合HPLC-MS的方法对前胡样品进行多种香豆素的含量测定，并应用于市售药材和混淆品的比较。
　　 第一部分液质联用技术鉴定前胡中的主要香豆素成分
　　 目的:总结前胡主要香豆素成分的电喷雾质谱裂解规律，建立灵敏、有效的用于鉴定前胡中该类香豆素成分的HPLC-MS分析方法。
　　 方法:通过电喷雾离子源正离子一级质谱扫描、母离子扫描和子离子扫描，研究3个3'，4'-二酰氧基取代开洛酮类香豆素成分对照品的质谱裂解途径，并总结其规律，进而联合采用母离子扫描-信息依赖-增强型子离子扫描（PREC-IDA-EPI）和多离子监测-信息依赖-增强型子离子扫描(MIM-IDA-EPI)两种模式鉴定前胡中该类香豆素化合物。根据母离子扫描图中同时出现的[M+NH4]+和[M+Na]+加合离子判断未知香豆素的分子量，根据两种模式产生的碎片离子信息推测化合物的结构。采用C18柱进行色谱分离，流动相体系为甲醇-1mmol/LNH4Ac，梯度洗脱。
　　 结果:总结了5项3'，4'-二酰氧基取代开洛酮类香豆素的裂解规律。①4'-C和3'-C上的两个酰氧基发生烷氧α裂解为开洛酮类吡喃香豆素的主要裂解途径;②m/z227为该类香豆素的特征碎片，可用以推断开洛酮类香豆素母核的存在;③此类化合物中成酯的酰氧基常见的有:乙酰氧基、异丁酰氧基、当归酰氧基、惕各酰氧基、2-甲基丁酰氧基、异戊酰氧基、千里光酰氧基等，而4'-C位上的烷氧键极易断裂，形成基峰;因此，m/z287、m/z315、m/z327、m/z327、m/z329、m/z329和m/z327可分别用于鉴定3'-C位上上述酰氧取代基;④加合离子[M+NH]、[M+Na]+比准分子离子峰[M+H]+更稳定，由此可判断化合物的分子量;⑤与简单香豆素、呋喃香豆素不同，香豆素母核上α吡喃环连续丢失CO并非该类香豆素的主要裂解途径。根据总结出的质谱裂解规律共鉴定出前胡提取物中24个该类香豆素。
　　 结论:本法灵敏、有效，可成功用于前胡中主要香豆素类化合物的鉴定。实验证实，PREC-IDA-EPI和MIM-IDA-EPI扫描模式联合使用能够提供更为丰富可信的结构信息，对控制药材质量具有重要意义。
　　 第二部分液质联用和库检索技术同时定性定量前胡及其混淆品中14种香豆素成分
　　 目的:建立14种香豆素的质谱库，并将质谱库检索技术与HPLC-MS结合，建立一种专属、准确、可同时对14种香豆素进行定性定量的HPLC-ESI-MS分析方法，并用于市售前胡药材的质量评价。
　　 方法:由MRM-IDA-EPI模式采集14种香豆素的质谱图，建立质谱库，结合库检索确证样品中色谱峰，并采用MRM正离子扫描模式进行定量分析。用所建立的方法对不同来源的35批前胡及市售药材进行分析。色谱条件:色谱柱:AgilentExtend-C18色谱柱（250×4.6mm，5μm）;柱温:25℃;流动相:乙腈(A)，0.1‰甲酸-0.2mmol/LNH4Ac缓冲溶液(B)，梯度洗脱，分析时间36min;流速:0.8mL/min;进样量10μL。质谱条件:离子源:电喷雾离子源;正离子监测模式;离子喷雾电压(ionsprayvoltage):5500V;帘气:20psi;雾化气(Gas1)60psi;加热气(Gas2):65psi;离子源温度(turbospraytemperature):650℃。定量模式采用多反应监测(MRM)，14种香豆素的监测离子对分别为404.1/327.1（白前胡甲素）、444.1/327.1（白花前胡乙素）、446.1/327.1（白花前胡素E）、409.1/247.1（紫花前胡苷）、271.0/203.0（欧前胡素）、271.0/203.0（异欧前胡素）、163.0/107.0（伞形花内酯）、217.0/202.0（佛手柑内酯）、217.0/202.0（花椒毒素）、187.0/131.0（补骨脂素）、187.0/131.0（异补骨脂素）、193.0/133.0（东莨菪内酯）、247.0/231.0（茴芹内酯）、247.0/217.0（异茴芹内酯）。化合物质谱采集采用多离子反应监测-信息依赖-增强型子离子扫描(MRM-IDA-EPI)模式。EPI模式下，扫描范围:50～500amu;固定填充时间:30ms;扫描速率:4，000amu/s;CES:35±15eV。
　　 结果:建立的质谱库成功应用于色谱峰的确证，14种香豆素在测定浓度范围内线性关系良好，检测限、定量限、精密度、准确度、仪器精密度和溶液稳定性均符合要求。样品测定结果表明，市售的“前胡”药材中仅有3批为正品白花前胡，且白花前胡甲素、白花前胡乙素的含量符合《药典》规定，与药材鉴定结果相符。白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E为白花前胡的主要成分，紫花前胡苷为紫花前胡的特征成分，其他药材样品在香豆素的种类和含量上与白花前胡差异甚大。
　　 结论:本研究以库检索技术辅助HPLC-MS定量分析，提高了方法的专属性，使得测定结果更准确可靠，对前胡药材的质量控制具有重要意义。应用建立的方法对35批不同来源的前胡及市售药材进行分析，由结果可知，白花前胡甲素、白花前胡乙素和白花前胡素E的含量为区分正品前胡与混淆品的关键因素;同时发现市售前胡药材质量良莠不齐，甚至绝大部分为混淆品，药材市场的监管与前胡质量控制亟待加强。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 液质联用技术鉴定前胡中主要香豆素类成分

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 液质联用和库检索技术同时定性定量前胡及其混淆品中14种香豆素成分

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 中药前胡研究进展

致谢

个人简历