大黄（庶虫）丸对实验性动脉粥样硬化大鼠UPP-NF-κB信号通路的影响

摘要

目的:本实验采用高脂饲料喂养联合大剂量维生素D3腹腔注射的方式复制大鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)模型，观察大黄(螷)虫丸(Dahuang Zhechong pill，DHZCP)对AS的防治作用，并探讨DHZCP抗AS的作用及其相关作用的机制，为临床应用提供理论依据。
　　方法:雄性Wistar大鼠45只，清洁级，适应性喂养1周后，称重标号，随机分为5组，每组9只，分别为:正常对照组(C)，模型组(M)、辛伐他汀组(S):5mg·kg-1·d-1、DHZCP低剂量组(L):0.7g·kg-1·d-1、DHZCP高剂量组(H):1.4g·kg-1·d-1。模型制备:正常对照组大鼠给予普通饲料，其余各组给予高脂饲料（配方:81.3％普通饲料、10％猪油、3％胆固醇、0.2％丙硫氧嘧啶、0.5％胆酸钠、5％白糖）。除正常对照组注射等剂量的蒸馏水外，其余各组在造模前均给予腹腔注射维生素D360万单位/kg（分三天，每天20万单位/kg），造模后第3、6周分别追加腹腔注射维生素D310万单位/kg。造模开始即给予相应剂量实验及阳性对照药物灌胃;正常对照组、模型组分别同时给予等量蒸馏水灌胃。连续观察12周，末次给药后禁食12h，断头取血，采用酶法检测血脂（TC、TG、HDL-C、LDL-C），放射免疫分析法检测各组血清炎性因子TNF-α。处死大鼠后迅速留取主动脉标本，一部分置于4％多聚甲醛固定，用于光镜观察主动脉病理变化和免疫组化观察主动脉泛素蛋白Ub表达;另一部分保存于液氮中，应用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉泛素活化酶(E1) mRNA、NF-κBmRNA及IκBmRNA表达变化。
　　结果:
　　1.实验大鼠一般情况
　　正常对照组大鼠饮食二便均正常，反应敏捷，皮毛整齐有光泽;其它高脂饲喂组大鼠在腹腔注射维生素D3后，逐渐出现明显形体消瘦，精神萎靡，反应迟钝，少动嗜睡等症状。12周末模型组大鼠体重比正常对照组明显减轻，两者差异有统计学意义(P＜0.01)，各给药组大鼠体重均比模型组增大，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。
　　2.主动脉形态学改变
　　HE染色可见正常对照组大鼠主动脉内膜表面光滑，中膜平滑肌纤维排列整齐，外层结缔组织未见明显异常;模型组大鼠血管内膜明显增厚，可见向腔内突起的斑块，中膜明显增厚，平滑肌细胞增生明显，弹力纤维排列紊乱，斑块内可见泡沫细胞积聚。DHZCP低剂量组病理改变与模型组相比，并无明显改善;但高剂量组及辛伐他汀组主动脉壁厚度均匀，内膜较光滑，局部轻微增厚，平滑肌细胞排列整齐，病理改变与模型组相比明显减轻。
　　3.DHZCP对大鼠血脂的影响
　　模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量比正常对照组明显升高，两者差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。预防性给药后，DHZCP低剂量组与模型组对比TC、TG、LDL-C明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，血清HDL-C含量上升，但无统计学意义(P＞0.05);辛伐他汀组及DHZCP高剂量组与模型组对比血清TC、TG、LDL-C明显降低(P＜0.01)，血清HDL-C含量明显升高（P＜0.05）。
　　4.DHZCP对大鼠血清肿瘤坏死因子-α的影响
　　模型组大鼠血清肿瘤坏死因子-α水平较正常对照组明显升高(P＜0.01);DHZCP低剂量组与模型组比较肿瘤坏死因子-α水平降低但无统计学意义(P＞0.05);辛伐他汀组及DHZCP高剂量组与模型组相比肿瘤坏死因子-α水平明显降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　5.DHZCP对大鼠主动脉组织泛素蛋白Ub表达的影响
　　模型组大鼠泛素蛋白Ub在内皮细胞核和细胞外基质均有表达，以内皮细胞核内的阳性染色较为明显，与正常对照组相比有明显差异，有统计学意义(P＜0.01);各给药组中泛素蛋白Ub的表达与模型组相比均有不同程度减弱，差异有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01)。
　　6 DHZCP对大鼠主动脉组织泛素活化酶(E1)mRNA、NF-κBmRNA及IκBmRNA表达的影响
　　模型组大鼠UBE1mRNA与NF-κBmRNA的表达比正常对照组明显增强(P＜0.01)，IκBmRNA的表达明显减弱(P＜0.01)，表明UPP-NF-κB通路被激活;经药物治疗，辛伐他汀组及DHZCP高剂量组UBE1mRNA与NF-κBmRNA的表达均比模型组减弱(P＜0.01)，IκBmRNA的表达明显增强（P＜0.05）。
　　结论:
　　1应用高脂饲料喂养联合大剂量维生素D3腹腔注射的方式成功复制了大鼠AS模型。
　　2 DHZCP可降低AS大鼠血清TC、TG、LDL-C的含量，升高血清HDL-C，具有调节血脂的作用。
　　3 DHZCP可降低AS大鼠血清TNF-α的表达，减少炎症因子的释放。
　　4 DHZCP通过下调主动脉泛素活化酶(E1)及NF-κBmRNA水平，上调IκBmRNA的表达，抑制泛素蛋白Ub合成，阻断UPP-NF-κB信号转导通路的活化，从而防治AS形成。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 泛素-NF-κB信号通路与动脉粥样硬化

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