津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE基因敲除小鼠脂肪组织中脂代谢的影响

摘要

目前糖尿病已成为严重危害我国人民身心健康的慢性疾病。糖尿病的高发被认为与现代人的生产生活方式紧密相关，不断高脂肪摄入所带来的的超重和肥胖已成为了致病的关键因素。有研究证实，脂肪代谢紊乱与糖尿病，尤其是Ⅱ型糖尿病的胰岛素抵抗(IR)关系密切。
　　脂代谢紊乱时过高的FFA水平，使得脂质过度沉积于脂肪组织中，从而降低胰岛素的敏感性。FFA还可减少脂肪组织中肿瘤坏死因子α(TNF2α)，纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)，白细胞介素-6(IL-6)，C-反应蛋白等细胞因子的释放，降低内源性生物活性多肽脂联素的分泌，而引起IR。开发一种既可降糖又有降脂作用的药物逐渐成为必须。
　　近年来由石家庄以岭药业开发的降糖类中药津力达颗粒在临床的应用得到了广泛认可。已有多项研究证实，津力达具有明显的降糖，降脂作用。但目前，该药的具体作用机制和靶点尚不清晰。
　　目的:通过高脂饲养ApoE-/-小鼠形成胰岛素抵抗并发脂代谢紊乱的动物模型，从改善胰岛素抵抗和脂肪组织代谢的角度探索津力达改善IR的具体作用机制。
　　方法:实验动物与分组:实验采用48只实验动物，8只雄性C57BL/6J小鼠设为正常对照组(NF)，正常饲料喂养。40只雄性ApoE-/-小鼠，给予自制高脂饲料喂养16周后，根据血糖水平随机分为5组:模型组(HF)，罗格列酮组（LGLT，1.33 mg/kg.d-1），津力达高剂量组（JLDH，3.80 g/kg.d-1），津力达中剂量组(JLDM，1.90g/kg.d-1)，津力达低剂量组(JLDL，0.95 g/kg.d-1)。正常对照组，模型组给予纯水，每组8只，各组均灌胃给药。每日一次，连续8周。
　　取材与指标检测:第8周末次给药后，禁食不禁水14-16h，进行葡萄糖耐量试验(OGTT)。OGTT实验结束后实验动物回笼正常饲养48h，待小鼠机体应激反应消失后，再次禁食不禁水14-16h，摘除小鼠的眼球取血1.5ml，脱颈椎处死实验动物，留取胰腺和腹部皮下脂肪组织。将血液离心，分离血清，全自动生化分析仪测定血清中FBG，FFA，TC，TG，HDL-C，LDL-C水平，放射免疫分析法检测空腹胰岛素(Fins)水平。采用10％福尔马林溶液固定胰腺与部分脂肪组织，HE染色，光镜观察组织变化。部分脂肪组织制成匀浆，用于丙二醛(MAD)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量测定，剩余部分脂肪组织，采用蛋白质印迹法（Western Blot）测定脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体蛋白(PPAR-γ)，胰岛素受体底物-1(IRS-1)，胰岛素受体底物-2(IRS-2)，葡糖糖转运载体-4(GLUT-4)，固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)，LDL受体(LDLR)，FAT蛋白(FAT)及肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)的表达。
　　结果:胰岛素敏感性评价:和NF组相比，HF组Fins，FBG和HOMA-IR水平均显著升高（P均＜0.01）。JLD可剂量依赖性地降低Fins和FBG水平，与HF组比较具有统计学差异（JLDH组P均＜0.01，JLDM组P均＜0.05），与HF组比较， JLD各组HOMA-IR水平明显下降具备统计学差异（JLDH组，JLDM组P均＜0.01，JLDL组P＜0.05）。其中JLDH组对Fins，FBG水平及HOMA-IR的作用和LGLT组相当。在给予大量葡萄糖后，各组实验动物血糖值均在30min升至顶峰，之后逐步下降，JLD各组血糖高峰值与HF组比较明显降低。
　　改善血清血脂指标:HF组血清中TC，TG，FFA，LDL-C浓度均较NF组显著升高（P均＜0.01），而HDL-C浓度低于NF组(P＜0.01)。JLD各剂量组对于血液中的TG有降低作用，与HF组比较差异显著(P均＜0.05)。JLDH组，JLDM组对于血液中的TC有降低作用，与HF组比较差异显著（JLDH组P＜0.01，JLDM组P＜0.05），JLD高，中剂量组尚可明显降低FFA及LDL-C的浓度(JLDH组LDL-C P＜0.01，其他P均＜0.05)，提高HDL-C的浓度（P均＜0.05）。
　　脂肪组织抗氧化指标:和NF相比，HF组SOD含量降低，MDA含量升高（P均＜0.05）。与HF组相比，JLD各剂量组均可不同程度降低MDA含量（P均＜0.05），JLD高，中剂量组尚可显著升高SOD的含量(P＜0.05)。
　　脂肪与胰腺组织HE染色:脂肪组织染色后，HF组可见单视野内脂肪细胞数量降低，体积增大，细胞长短经升高。LGLT组，JLDH组与 NF组相比未见明显异常，JLDM组，JLDL组则可见不同程度的脂肪细胞体积增大，及细胞长短径的升高。胰腺染色后，HF组胰腺内胰岛结构不清，细胞形态不完整，数目减少，体积变小，LGLT组和JLD各组和HF组相比均有不同程度的减轻。
　　脂肪组织分子生物学检测:Western blot结果显示，和NF组相比，HF组FAT及SREBP-1C的表达上调，CPT1，GLUT-4，IRS-1，IRS-2及PPARγ的表达下调（P均＜0.05），对LDLR未见明显影响。和HF组相比，JLD三个剂量组均可上调IRS-2的表达，JLDM和JLDH组尚可上调CPT1，IRS-1，IRS-2的表达及下调SREBP-1C的表达，JLDH尚可上调GLUT-4及PPARγ的的表达，但LGLT组，JLD各组FAT，LDLR的表达未见明显作用，LGLT组均可上调GLUT-4，IRS-1，IRS-2及下调SREBP-1C的表达。
　　结论:
　　1高脂饲料喂养APOE-/-小鼠连续数月，可致小鼠出现高血糖，胰岛素抵抗和脂质代谢紊乱。这应该与脂肪组织氧化应激过强，糖的利用降低及脂质沉积增加有关。
　　2津力达可以不同程度改善高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠的胰岛素抵抗和脂代谢紊乱，这应该与其可降低脂肪组织的氧化应激水平有关，可促进血糖的利用及脂质转化有关。

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