17-β雌二醇和2-甲氧基雌二醇对去势及低氧性肺动脉高压大鼠eNOS/NO的影响

摘要

目的:肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)是多种心肺疾病发展过程中重要的病理生理环节，从目前研究来看多种原因可导致PAH，其中由长期慢性低氧造成的低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonaryarterial hypertension，HPAH）成为近年来研究的热点。由肺血管内皮细胞产生的一氧化氮(nitric oxide，NO)对维持肺血管正常结构及肺循环低阻力状态有着重要的作用。一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是利用体内L-精氨酸(arginine，Arg)合成NO的关键酶，是参与调节NO生成的重要物质。17β-雌二醇(17β-estradiol/estradiol，E2)及其代谢产物2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2ME)可干预低氧性肺动脉高压的形成过程。本研究拟应用经去势处理后雌性SD大鼠建立低氧性肺动脉高压模型，通过观察并比较在E2及2ME干预下各组大鼠血清中NO、eNOS含量及肺组织中eNOS mRNA含量，探讨并比较E2和2ME对去势低氧性肺动脉高压大鼠eNOS/NO的影响。
　　方法:
　　1、模型建立:将80只健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、去势组、去势+E2组、去势+2ME组、假手术+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组、去势+低氧组。假手术组:打开腹腔找到卵巢后不做处理，直接还纳;去势组:行双侧卵巢切除术:沿输卵管找到双侧卵巢后，结扎输卵管及营养血管，将卵巢切除后关闭腹腔;去势+E2组:将卵巢切除后，予E2（20μg·kg-1·d-1）皮下注射;去势+2ME组:切除卵巢后，予2ME（240μg·kg-1·d-1）皮下注射;假手术组+低氧组:假手术后放入动物低氧箱内饲养，24h持续供应氧浓度为（10±0.5）％空气和氮气的混合气体。去势+低氧+E2组:切除卵巢后，给予E2（20μg·kg-1·d-1）皮下注射并置于上述低氧环境下饲养。去势+低氧+2ME组:切除卵巢后，给予2ME（240μg·kg-1·d-1）皮下注射并置于上述低氧环境下饲养;去势+低氧组:切除卵巢后置于上述低氧环境下饲养。8组大鼠均置于同一房间以相同饲料喂养8周。
　　2、观察大鼠一般状况及肺循环受累情况:日常观察大鼠一般状况，饲养8周后测量大鼠体重;用右心导管法测定大鼠肺动脉压并计算出平均肺动脉压(mean pulmonary artery pressure，mPAP)，后断头放血处死大鼠，依据RV/(LV+SP)计算出右心室肥大指数(right ventricule hypertrophyindex，RVHI)，并对肺小动脉重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling，HPSR)进行观察。
　　3、采用硝酸还原酶法测定大鼠血清中NO含量。
　　4、应用化学法测定大鼠血清中eNOS的含量。
　　5、应用RT-PCR测定肺组织中eNOS mRNA含量。
　　结果:
　　1、大鼠的一般状态及体重情况:低氧箱中大鼠出现活动及进食减少，毛色变暗，同时随着实验进行，其活动逐渐减少，最终以静卧为主，无死亡现象发生。而常氧条件下的大鼠生长状况及活动度良好，与实验初期无异。与假手术组比较，假手术+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组大鼠体重增长缓慢(P＜0.05)，且去势+低氧组大鼠体重减轻尤为明显（P＜0.01），而去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠体重与假手术组无明显差异。
　　2、大鼠平均肺动脉(mPAP)比较:与假手术组大鼠比较，假手术+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组大鼠mPAP均呈现明显升高(P＜0.01)，且去势+低氧组大鼠mPAP升高更为显著，去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组大鼠mPAP升高幅度不及假手术+低氧组和去势+低氧组大鼠;而去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠mPAP与假手术组无明显差异
　　3、大鼠右心室及肺小血管形态改变:在光镜下，假手术组、去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠肺小动脉血管内皮细胞形态正常、分布均匀连续，并无水肿坏死，肺小动脉管壁薄而结构形态正常;而去势+低氧组大鼠肺小动脉平滑肌细胞增多，中膜明显增厚，管腔变窄;假手术+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组肺动脉管壁介于假手术组及去势+低氧组之间。与假手术组比较，假手术+低氧组、去势+低氧+E2组、去势+低氧+2ME组大鼠右心肥厚指数即RV/(LV+SP)比值均明显升高(P＜0.01)，且以去势+低氧组大鼠升高更为明显(P＜0.01)，而去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠右心肥厚指数与假手术组无明显差异。
　　4、大鼠血清NO含量的变化:与假手术组比较，假手术+低氧组、去势+低氧+E2组大鼠血清NO含量减少(P＜0.05)，且以去势+低氧组大鼠血清NO含量减少最为明显(P＜0.01)，去势+低氧+2ME组大鼠血清NO含量介于去势+低氧+E2组与去势+低氧组大鼠之间;而去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠血清NO含量与假手术组无明显差异
　　5、大鼠血清eNOS含量的变化:与假手术组比较，去势+低氧+E2组及去势+低氧+2ME组大鼠血清eNOS含量明显降低（P＜0.05），且去势+低氧组大鼠血清eNOS含量降低更为明显(P＜0.01);而假手术+低氧组、去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠血清eNOS含量与假手术组无明显差异。
　　6、大鼠肺组织eNOS mRNA含量的比较:与假手术组比较，去势+低氧+E2组及去势+低氧+2ME组大鼠肺组织eNOS mRNA含量明显降低(P＜0.05)，且以去势+低氧组大鼠肺组织eNOS mRNA含量降低更为明显(P＜0.01);而假手术+低氧组、去势+E2组、去势+2ME组、去势组大鼠肺组织eNOS mRNA含量与假手术组无明显差异。
　　结论:
　　1、低氧环境下，大鼠血清中NO含量明显减少。拥有完整卵巢的大鼠及补充E2后的大鼠血清中NO含量有所增加，补充2ME后的大鼠血清中NO含量也有所增加，但效果不及补充E2。
　　2、低氧环境下，大鼠血清中eNOS含量明显减少。拥有完整卵巢的大鼠血清中eNOS含量与常氧环境下的大鼠无异，补充E2及2ME治疗后大鼠血清中eNOS含量均有所增加，且彼此无明显差异。
　　3、大鼠肺组织中eNOS mRNA含量变化趋势同eNOS含量变化。
　　4、E2及2ME均能有效降低低氧性肺动脉高压、改善低氧性肺动脉高压血管重建及阻抑右心室肥厚，推测E2及2ME对eNOS/NO通路具有协同作用。此外，E2在增加NO含量方面作用更为强大。

目录

声明

摘要

英文缩写

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 NO／NOS与低氧性肺动脉高压研究进展

致谢

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