头孢丙烯人体内定量分析方法及其片剂健康人体生物等效性研究

摘要

头孢丙烯为第二代半合成头孢菌素类抗生素，是顺式和反式两种异构体的混合体，顺式异构体与反式异构体的含量比值约9∶1，被临床广泛应用。目前已有文献报道，均采用微生物法和高效液相色谱法测定人血浆中头孢丙烯的浓度，但仍存在一定的局限性。
　　头孢丙烯的顺反异构体不同于手性化合物的光学异构体，在非手性条件下即可实现分离。本研究首次建立LC-MS/MS同时测定人血浆中顺式头孢丙烯、反式头孢丙烯的定量分析方法;以国内已经批准上市的原研药头孢丙烯片（中美上海施贵宝制药有限公司生产）为参比制剂，国产头孢丙烯片（北京京丰制药有限公司生产）为受试制剂，对国产头孢丙烯和原研药进行生物等效性评价;同时探讨顺反头孢丙烯药代动力学是否具有立体选择性。
　　第一部分人血中顺式头孢丙烯和反式头孢丙烯浓度测定方法的建立
　　目的:建立人血浆中顺式头孢丙烯和反式头孢丙烯浓度的LC-MS/MS定量分析方法。
　　方法:在冰水浴条件下，以头孢氨苄为内标，血浆样本经乙腈蛋白沉淀法处理后用Synergi4u Hydro-RP80A色谱柱(150 mm×2.0 mm I.D.，4μm粒径，美国Phenomenex Inc.)进行分离，以甲醇-0.2％甲酸(25∶75，v/v)为流动相。采用电喷雾电离(ESI)源负离子模式、多反应监测(MRM)，用于定量分析的离子反应分别为m/z388.0→m/z205.0（顺式、反式头孢丙烯）和m/z346.1→m/z268.1（内标头孢氨苄）。
　　结果:在本研究建立的LC-MS/MS样本测定条件下，顺式头孢丙烯在0.125～16.0μg/mL血浆浓度范围内线性良好，r＞0.998，反式头孢丙烯在0.0403～1.72μg/mL血浆浓度范围内线性良好，r＞0.998，顺式和反式头孢丙烯的定量下限分别为0.125μg/mL和0.0403μg/mL;顺式头孢丙烯批内和批间精密度(RSD)均小于9.7％，准确度(RE)在-0.8％～4.7％间，反式头孢丙烯批内和批间精密度(RSD)均小于6.5％，准确度(RE)在0.6％～2.2％间;顺式头孢丙烯的平均基质效应、平均回收率分别为(109.7±3.2)％和（80.5±1.9）％，反式头孢丙烯的平均基质效应、平均回收率分别为（104.5±3.3）％和（80.2±2.8）％;顺式头孢丙烯和反式头孢丙烯血浆样本冰水浴中放置6h、处理后室温放置10h、反复冻融3次和冻存于-80℃35 d后均稳定。
　　结论:本研究首次建立了测定人血浆中头孢丙烯浓度的LC-MS/MS分析方法，此方法是一种快速、灵敏、稳定、重现性高的质谱方法。该法符合生物样品分析要求，可用于头孢丙烯片的生物等效性研究。
　　第二部分头孢丙烯片剂健康人体生物等效性研究
　　目的:健康受试者单剂量空腹口服北京京丰制药有限公司研制的头孢丙烯片（受试制剂）与中美上海施贵宝制药有限公司生产的头孢丙烯片（参比制剂）后，通过已建立的测定人血浆中顺式和反式头孢丙烯浓度的LC-MS/MS定量分析方法，测定血浆中顺式头孢丙烯和反式头孢丙烯的浓度，评价受试制剂与参比制剂是否具有生物等效性。
　　方法:采用单中心、随机、开放、双周期、自身交叉的试验设计方法。24例健康男性受试者随机交叉单剂量空腹口服头孢丙烯片受试制剂或参比制剂各500 mg，于给药前和给药后0～11 h内不同时间点采集血样。采用LC-MS/MS定量分析方法测定顺式和反式头孢丙烯的血药浓度，运用WinNonlin6.3软件(美国Pharsight Corporation)处理血药浓度数据和计算药代动力学参数，对AUC0-t、AUC0-∞和Cmax经对数转换后进行方差分析，采用双向单侧t检验与90％置信区间法评价和判断受试制剂和参比制剂是否具有生物等效性。
　　结果:24例男性健康受试者口服受试制剂和参比制剂500 mg后顺式头孢丙烯的主要药代动力学参数AUC0-t分别为（28.91±3.76）μg·h/mL和（29.47±3.43）μg·h/mL，AUC0-∞分别为（29.27±3.80）μg·h/mL和(29.84±3.46)μg·h/mL，Cmax分别为（8.73±1.22）μg/mL和（9.00±1.30）μg/mL，Tmax分别为1.38(1.00～4.00)h和1.50(1.00～3.00)h，t1/2分别为(1.30±0.14)h和（1.28±0.14）h;反式头孢丙烯的主要药代动力学参数AUC0-t分别为（2.70±0.38）μg·h/mL和（2.83±0.36）μg·h/mL，AUC0-∞分别为(2.73±0.38)μg·h/mL和(2.86±0.37)μg·h/mL，Cmax分别为(0.906±0.143)μg/mL和（0.956±0.13）μg/mL，Tmax分别为1.50(1.00～4.00) h和1.50(1.00～3.00)h，t1/2分别为（1.05±0.19）h和（1.08±0.17）h;顺式头孢丙烯+反式头孢丙烯的主要药代动力学参数AUC0-t分别为(31.57±4.09)μg·h/mL和（32.29±3.72）μg·h/mL，AUC0-∞分别为（32.00±4.14）μg·h/mL和（32.69±3.79）μg·h/mL，Cmax分别为（9.64±1.36）μg/mL和（9.94±1.43）μg/mL，Tmax分别为1.38(1.00～4.00)h和1.50(1.00～3.00))h，t1/2分别为（1.28±0.12）h和（1.25±0.15）h。
　　Cmax、AUC0-t和AUC0-∞经对数转换后进行方差分析，两种头孢丙烯片的Cmax、 AUC0-t和AUC0-∞差异无显著性(P＞0.05)。采用双向单侧t检验与90％置信区间法，24名受试者口服受试制剂和参比制剂500 mg后顺式头孢丙烯的AUC0-t、AUC0-∞90％置信区间分别为95.92％～100.03％、95.91％～99.98％。反式头孢丙烯的AUC0-t、AUC0-∞90％置信区间分别为92.57％～98.10％、92.63％～98.09％。顺式头孢丙烯+反式头孢丙烯AUC0-t、AUC0-∞90％置信区间分别为95.56％～99.73％、95.71％～99.81％。
　　结论:结果表明，以顺式头孢丙烯+反式头孢丙烯的AUC和Cmax作为生物等效性评价的主要指标，以顺式头孢丙烯、反式头孢丙烯AUC和Cmax作为生物等效性评价的次要指标，判断受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 人血浆中顺式头孢丙烯和反式头孢丙烯浓度测定方法的建立

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 头孢丙烯在健康人体的生物等效性研究

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 手性药物的色谱分离技术及其研究进展

致谢

个人简历