进展期胃癌患者术中腹腔脱落细胞及相关基因的研究

摘要

目的:研究进展期胃癌患者手术过程前、后腹腔灌洗液脱落细胞及其DNA异倍体的阳性率，探讨其与癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白7(CK7)、基质金属蛋白酶7(MMP7)等相关基因、临床病理的关系以及手术对其的影响。
　　方法:选取前瞻性、多中心、开放、随机对照Ⅲ期临床试验(NCT01516944)中132例直接手术的进展期胃癌患者，所有患者术前均行全腹平扫+增强CT等影像学检查以排除远处转移，并经胃镜咬检6～8块组织，病理诊断为胃腺癌，且均未使用化疗或放疗。手术均拟行标准的D2根治术，如开腹后发现已有远处转移则视情况行姑息手术，手术全过程采用严格的无瘤操作。手术开始后探查腹腔，患者头高脚低位，提起横结肠系膜，用生理盐水300～400ml(37℃)冲洗下腹部及Doglas窝，使用负压吸引器直接将灌洗液吸入干净的标本袋中，如有腹水则有直接抽出，收集300ml左右，此为手术过程前组标本;手术结束关腹前使用无菌蒸馏水(37℃)冲洗3次，共约10分钟左右，负压吸尽，再用生理盐水300～400ml(37℃)冲洗全腹腔，使用新的吸引器吸取灌洗液300ml左右，此为手术过程后组标本，两次标本均行腹腔灌洗液细胞学(peritoneallavage cytology，PLC)检查，并使用Feulgon染色，检测其DNA倍体，倍体≥5c为异常，给出四张图表报告，第一张图横轴为DNA含量，纵轴为细胞数量，正常值＜5c。第二张图横轴为DNA含量，纵轴为细胞核面积。第三张图为DNA含量最高的前20个DNA倍体数值和图像。最后一张为数值最大的DNA倍体的镜下图像。报告结果为（阴性）未见DNA倍体异常细胞;（阳性）可见DNA倍体异常细胞。同时检测CEA、CK7、MMP7，在玻片上观察目标细胞（考虑为癌细胞且需除外炎细胞、组织细胞和增生间皮细胞等）。CEA和MMP7定位于细胞浆，胞质均匀状着棕黄色判定为阳性，不着色为阴性;CK7定位于细胞质，着色判定为阳性，否则为阴性;所有标本均加做WT-1、Calretinin以排除间皮细胞。分析PLC和DNA异倍体阳性与各临床病理参数的关系以及手术对其的影响。
　　结果:
　　1、目前PLC被认为是检测腹腔脱落癌细胞(exfoliated cancer cells，ECC)的金标准，操作方法简便，但其敏感性较低。
　　2、132例胃癌患者中手术过程前组有24例PLC阳性(18.18％)，而异倍体阳性的有35例(26.52％)，具有统计学差异(P=0.001)，其敏感度为100％，特异度为89.81％。
　　3、手术过程前组的CEA、CK7、MMP7的阳性率分别为27.27％、24.24％、25％;而手术过程后的CEA、CK7、MMP7的阳性率分别为15.15％、14.39％、12.88％。PLC阳性与CEA、CK7的阳性率存在差异(P＜0.05)，但DNA异倍体阳性与CEA、CK7、MMP7的阳性率无统计学差异(P＞0.05)。
　　4、根治性的R0手术PLC的阳性率为12.07％，明显低于根治性的R1或R2或姑息手术的62.5％(P＜0.05)。
　　5、手术过程前腹腔灌洗液阳性与肿瘤最长径、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期、手术根治度有关(P＜0.05)，与性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、Lauren分型、Borrmann分型无关(P＞0.05)。
　　6、手术全程采用严格的无瘤操作，经过关腹前大量蒸馏水冲洗后，手术过程后组的PLC阳性率为9.09％，比术前的18.18％有了明显的下降，且两者之间存在统计学差异（P=0.004）。24例手术过程前组PLC阳性的患者，有14例手术过程后转为阴性;但是，有两例患者手术过程前组PLC为阴性（可见异型细胞，且DNA倍体均＞5c），而手术过程后变为了阳性，此2例患者手术过程前的PLC结果及有可能是假阴性，而术后的结果为真阳性;亦有可能是术中无瘤操作不当造成的医源性的肿瘤细胞脱落。
　　结论:
　　1、PLC法目前仍是诊断ECC的金标准，但是其敏感度较低，阳性率不高，而DNA倍体及CEA、CK7、MMP7等相关基因的检测结果阳性率比PLC高。
　　2、手术根治度越高，PLC的阳性率就越低。
　　3、这同时也跟肿瘤的分期相关，同样随着肿瘤浸润深度、淋巴转移、远处转移、TNM分期增加，其做根治手术的成功率就越低，PLC的阳性率亦会增高。
　　4、手术全程中采用严格的无瘤术后，可明显降低癌细胞的脱落种植。

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材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 胃癌腹腔脱落细胞及相关指标检测的研究进展

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