血肿腔内注入神经生长因子治疗大鼠脑出血

摘要

目的:脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是对人类健康产生严重威胁的疾病且病死率高。脑出血后神经功能迅速恶化可能与脑出血引起脑水肿以及多种路径神经损伤相关。如占位效应、血肿周围继发缺血、血肿形成过程中的流体静力压、血凝块的回缩、凝血级联反应、凝血酶的产生、血红蛋白的毒性、红细胞溶解、补体的激活、血脑屏障的破坏、血肿周围组织的炎症反应和细胞凋亡等。目前炎症反应与脑水肿早已是脑血管病中研究热点。水通道蛋白-4（aquaporin-4，AQP-4）在脑组织中表达是与脑水肿形成关系密切的水的跨膜转运有关蛋白质。白细胞介素-10(interleukin-10，IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)均为炎症反应过程中起重要作用的炎性因子，在一定程度上可以反应炎症的不同方面。神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是近几年逐渐开始应用于临床治疗的药物，其对神经细胞的生长、发育、存活均起着极其重要作用，在神经系统受损时可以防止神经元凋亡及死亡，促进神经元自我修复。NGF的作用可以表现在对神经元的存活;神经轴突的再生及方向的迁移;神经轴突功能性连接于靶向细胞;促进髓鞘形成。该实验主要研究在于血肿腔内注入NGF对大鼠ICH后血肿周围AQP-4、IL-10、TNF-α变化的影响。为脑出血后行锥颅术联合药物注入NGF提供了实验依据。
　　方法:体重范围为290-310 g，健康雄性SD大鼠144只，随机分为四个组:神经生长因子组、地塞米松组、脑出血模型组和生理盐水组，每组36只，其中每组取18只用于脑含水量测定。将SD大鼠麻醉，应用立体定位仪固定，于大鼠尾部取60μl非肝素化自体动脉血，右侧尾状核内注入，以制备大鼠ICH模型。24小时后以Longa评分为准则选取合格大鼠，脑出血模型组不给予特殊药物处理，余各组分别于立体定位仪固定下在相同部位血肿腔内给予相应药物处理，神经生长因子组1.67×10-3AU/kg[1,2]，地塞米松组1 mg/kg[3],生理盐水组0.2 ml/kg注入，分别于48h、3d、7d三个时间点各取6只大鼠解剖取脑，切取血肿周围脑组织，每个脑组织选取血肿周前、中、后部位切片，各切三张。免疫组化方法进行观察AQP-4、IL-10、TNF-α，在高倍镜视野下每张片子取5张图片并计算阳性表达。在48h、3d、7d三个时间点各取6只大鼠解剖取脑，测湿重及干重，计算脑组织含水量，用SPSS13.0统计数据分析。
　　结果:
　　1大鼠脑组织水含量的变化
　　脑出血模型组、生理盐水组、地塞米松组以及神经生长因子组四组均在48h便已升高，3d到达高峰，7d有所降低。脑出血模型组、生理盐水组在3d时脑组织含水量无明显统计学差异(P＞0.05)。地塞米松组和神经生长因子组在48h时脑组织含水量无明显统计学差异(P＞0.05)。剩余各组的脑组织含水量在ICH后表现出具有统计学差异（P＜0.05）。
　　2大鼠AQP-4表达的变化
　　地塞米松组、神经生长因子组两组在48h和7d之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。脑出血模型组、生理盐水组与地塞米松组、神经生长因子组比，在脑出血后48h、3d、7d的AQP-4表达均具有统计学差异(P＜0.05)。四组在不同时间点AQP-4表达趋势为48h便已升高，3d达高峰，7d有所下降。
　　3大鼠TNF-α表达的变化
　　脑出血模型组、生理盐水组、地塞米松组和神经生长因子组各组在脑出血后48h、3d、7d的TNF-α的表达均具有统计学差异(P＜0.05)。TNF-α的表达趋势为48h开始增多，3d达高峰，7d时有所下降。
　　4大鼠IL-10表达的变化
　　地塞米松组与神经生长因子组相比，IL-10在三个时间点表达相差不大，没有统计学差异(P＞0.05)。脑出血模型组、生理盐水组与前两组比较在48h、3d、7d IL-10表达均具有统计学差异（P＜0.05）。IL-10的表达趋势为48h开始增多，3d达高峰，7d时有所下降，但IL-10在脑出血后7d内表达均较高，总体波动相对较小。
　　结论:
　　1非肝素化自体动脉血颅内注入制造大鼠脑出血模型成功率较高。
　　2 ICH大鼠血肿周围AQP-4的表达与脑组织水含量呈正相关。
　　3 ICH大鼠血肿周围TNF-α的表达参与脑组织坏死，且与脑水肿成正相关。
　　4 ICH大鼠IL-10介导抗炎反应，短时间内迅速升高，持续时间教长，波动较小。
　　5血肿腔内注入NGF治疗ICH可以减低脑组织含水量，血肿周围AQP-4、TNF-α表达降低，IL-10表达增高。说明NGF可以减轻水肿，抑制促炎因子释放，调节抗炎因子的表达，缓解脑出血后神经功能的进一步损伤。为ICH后行锥颅术并药物NGF治疗提供实验依据。

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附图

附表

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结论

参考文献

综述 脑出血后脑水肿与炎性反应

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