口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血miRNA的表达及意义

摘要

目的:检测分析口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中miRNA表达谱，筛选出口腔颌面部鳞状细胞癌差异性血清miRNA，对筛选出的miRNA进行选择性验证，寻找特异性表达的血清miRNA，为口腔颌面部鳞状细胞癌的早期诊断、早期治疗以及预后判定提供实验依据和理论基础。
　　方法:
　　1、按照外周血采集规范收集3例口腔颌面部鳞状细胞癌患者的血液标本作为实验组。实验组患者未进行任何特殊治疗，均有组织病理学诊断依据，排除其它系统肿瘤或和口腔转移性肿瘤。对照组采用3例正常人群的外周血。于清晨空腹抽取外周静脉血2mL，抗凝处理，-80℃保存。血液标本在室温下放置时间不超过1h。
　　2、使用RNA提取试剂盒对标本进行总RNA的提纯。
　　3、进行RNA浓度和纯度的检测。
　　4、稀释样本使各其RNA浓度相等，按照试剂盒的说明书进行RNA逆转录。
　　5、96孔板选择human serum plasma mima pcr array试剂盒，进行qRT-PCR反应进行差异性miRNA的筛选。
　　6、选取外周血hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p进行验证，扩大标本量至每组30例;提取总RNA，进行RNA浓度和纯度的检测。
　　7、稀释样本使各样本的RNA浓度相等，进行qRT-PCR反应。
　　8、结果判定及统计学分析
　　miRNA的表达水平差异用2-ΔΔCT来表示，整理每个基因的CT值，再用每组自身的目的基因CT值减去自身内参基因CT值，即为ΔCT，公式为ΔCT=CT（目的基因）-CT（内参基因），求其均值;其中C.39作为内参。再用本次实验中实验组的ΔCT减去对照组的ΔCT，公式为ΔΔCT=ΔCT（实验组）-ΔCT(对照组)。Fold Change值为2-ΔΔCT，求其均值。Fold Change大于2表明实验组中miRNA表达水平较对照组的上调且有意义。FoldChange小于0.5表明实验组中miRNA表达水平较对照组的下调且有意义。以上所有统计学方法均在Excel软件上进行。
　　利用相对定量的方法来检测hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中表达水平的差异。miRNA的表达水平差异用RQ=2-ΔΔCT来表示。两种miRNA在口腔颌面部鳞状细胞癌与正常组外周血中的表达水平的以均值±标准差((x)±SD)表示，采用完全随机的两独立样本的t检验比较各组件差异，P＜0.05为显著性差异。以上所有统计学方法均在SPSS13.0统计软件上进行。
　　结果:
　　1、口腔颌面部鳞癌患者外周血miRNA高于正常人外周血miRNA且有意义的miRNA有8个(Fold Change＞2)。
　　2、口腔颌面部鳞癌患者外周血miRNA低于正常人外周血miRNA且有意义的miRNA有18个(Fold Change＜0.5)。
　　3、30例实验组的hsa-miR-222-3p表达水平平均值为5.587±0.218，30例对照组的表达水平平均值为0.972±0.177。口腔颌面部鳞状细胞癌组的hsa-miR-222-3p表达水平较正常组中的表达水平间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　4、30例实验组的hsa-miR-423-5p表达水平平均值为0.431±0.066，30例对照组的表达水平平均值为1.206±0.195。口腔颌面部鳞状细胞癌组的hsa-miR-423-5p表达水平较正常组中的表达水平间差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论:
　　1、在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中miRNA的表达水平较正常组存在差异，推测外周血miRNA的表达水平与口腔颌面部鳞状细胞癌的发生有关。
　　2、hsa-miR-222-3p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中高表达;hsa-miR-423-5p在口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血中低表达。推测hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p有可能成为诊断口腔颌面部鳞状细胞癌的生物标记物。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 筛选口腔颌面部鳞状细胞癌患者外周血表达差异miRNA

前言

实验材料与方法

结果

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 外周血hsa-miR-222-3p、hsa-miR-423-5p在口腔面部鳞状细胞癌中特异性表达的验证

前言

实验材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 miRNA的研究进展及其与口腔颌面部鳞状细胞癌的关系

致谢

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