脂肪因子Vaspin在妊娠期糖尿病中的作用

摘要

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是妊娠期首次出现或发生的糖代谢异常。以往报道发病率2～5％，GDM可以造成子痫前期、巨大儿、肩难产、新生儿高胆红素血症、RIDS等母儿并发症，严重影响母婴健康。
　　目前认为GDM的发病机制包括:脂肪细胞功能的改变、胎盘和激素的变化、炎症和氧化应激。这些均与胰岛素抵抗有关。而脂肪细胞因子与胰岛素抵抗关系密切。丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)是一种新的具有胰岛素增敏作用的脂肪细胞因子，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族。近来报道其与T2DM的发生有关。但关于vaspin与GDM的关系，研究尚少。
　　本研究分别测定妊娠中、晚期GDM患者血清及脐血vaspin水平，探讨其与糖、脂代谢及胰岛素抵抗间关系，同时测定胎盘组织vaspin mRNA及蛋白含量，比较GDM与正常妊娠胎盘组织vaspin转录及蛋白水平的差异以及与新生儿体质量间的关系，以探讨vaspin在GDM发生中的作用和与胎儿生长发育的关系。本研究还通过BeWo细胞的体外培养，观察IL-6、高糖等不同因子对BeWo细胞vaspin表达的影响，探讨其调控机制。
　　第一部分 GDM患者妊娠中期血清Vaspin水平
　　目的:测定vaspin在妊娠中期血清中的表达，探讨vaspin在妊娠期糖尿病(GDM)发病中的作用及其与胰岛素抵抗的相关性。
　　方法:选择2013年1月至2013年6月于河北省人民医院妇产科就诊的孕24～28周的单胎孕妇，根据75g葡萄糖耐量试验(OGTT)结果，分为GDM组30例和正常妊娠组(NGT)28例;同期在体检中心健康查体的糖耐量正常的健康育龄非妊娠妇女(NC)27例为正常对照组。采用葡萄糖氧化酶法检测各组妇女空腹血糖(FPG)、服糖后1h及2h血糖水平;采用放射免疫法检测各组妇女空腹胰岛素(FIN)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);检测各组妇女的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白（HDL）及低密度脂蛋白(LDL)水平;ELISA法测定血清vaspin、IL-6水平。
　　结果:
　　1 GDM组妇女TC、TG、HDL及LDL水平分别为（5.52±0.87）、（2.79±0.77）、（1.75±0.44）及（3.34±0.77）mmol/L，NGT组妇女分别为（5.85±0.78）、（2.52±0.71）、（1.94±0.39）及(3.4±0.62)mmol/L，两组妇女血脂水平明显高于正常对照组，分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
　　2 GDM组空腹血糖、糖耐量1h血糖及糖耐量2h血糖[(5.48±0.69、10.87±1.84、8.55±1.76)mmol/L]均明显高于NGT组[(4.54±0.28、7.42±1.33、6.2±0.92)mmol/L]和NC组[（5.16±0.42、7.58±0.83、6.75±0.68）mmol/L]，分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
　　3 GDM组妇女INS水平（14.03±5.57μU/mL）、HOMA-IR（3.45±1.46）明显高于NGT组（11.49±4.18μU/mL;2.32±0.86）及NC组（8.88±3.75μU/mL;2.03±0.87），分别比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　4 GDM组及NGT组妇女血清vaspin水平[分别为（5.10±2.36）、（5.43±1.88）ng/mL]显著高于NC组（2.03±2.34ng/mL），分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05);GDM组妇女血清vaspin水平虽略低于NGT组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　5 GDM组及NGT组妇女血清IL-6水平[分别为（296.96±122.38）、（286.80±97.66）ng/mL]均显著高于NC组（234.38±90.86ng/mL），分别比较，差异均有统计学意义(P＜0.05); GDM组妇女血清IL-6水平虽略高于NGT组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　6 GDM组和NGT组妇女vaspin水平与FPG、HOMA-IR等指标均无相关性(r分别=-0.16，-0.01，0.33，P＞0.05)。而血清vaspin水平与胆固醇（r:0.42，P:0.02;r:0.71，P＜0.01）及甘油三酯(r:0.51，P＜0.01;r:0.38，P:0.046)均呈正相关，GDM组vaspin水平与IL-6呈负相关(r:-0.47，P:0.01)。NC组血清vaspin水平与INS及HOMA-IR呈负相关(r:-0.42P:0.03; r:-0.41, P:0.03)。
　　7 NGT组血清IL-6水平与空腹血糖相关(r:0.52，P:0.01)。GDM组IL-6与空腹血糖（r:0.54，P＜0.01）、孕前（r:0.44，P:0.02）及当前BMI(r:0.45，P:0.01)相关。
　　结论:
　　1、妊娠期vaspin水平较健康非妊娠妇女明显升高，而这种升高与孕妇的血糖状态无关，vaspin主要来自胎盘分泌。
　　2、Vaspin可能参与糖、脂代谢，与GDM的发生相关。
　　3、Vaspin可能是GDM时脂代谢指标，并受IL-6影响。
　　第二部分 GDM患者妊娠晚期血清及脐血vaspin水平
　　目的:测定vaspin、IL-6在GDM及正常妊娠妇女妊娠晚期血清及脐血中的表达水平，探讨两者在GDM发生中的作用。
　　方法:选取河北省人民医院妇产科于2012年10月至2013年10月行择期剖宫产终止妊娠的单胎孕妇。根据妊娠中期75g葡萄糖耐量试验(OGTT)结果，分为GDM组30例和正常妊娠组(NGT)27例。采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)，采用放射免疫法检测各组妇女空腹胰岛素(FIN)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);检测各组妇女的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清vaspin、IL-6水平。
　　结果:
　　1、GDM组TC、TG、HDL及LDL水平分别为(4.67±0.89)、(3.26±1.03)、（1.32±0.23）及(2.73±0.75)mmol/L，NGT组妇女分别为(4.93±0.79)、（2.80±0.93）、（1.40±0.26）及（2.89±0.69）mmol/L，两组比较无明显区别（P＞0.05）。
　　2、GDM组空腹血糖和糖化血红蛋白分别为（4.61±0.58）mmol/L、（5.88±0.38），NGT组空腹血糖为（4.23±0.51）mmol/L，糖化血红蛋白水平为（5.48±0.38），两组相比GDM组明显高于NGT组（P＜0.05，P＜0.01）。
　　3、GDM组和NGT组胰岛素水平及胰岛素抵抗指数无明显区别(12.68±4.74 vs11.63±4.91,P=0.41;2.38±1.48 vs2.24±1.08,P=0.17)。
　　4、GDM组和NGT组产前及产后三天血清vaspin水平分别为[（0.49±0.24）、（0.83±0.27)]ng/mL，和[（0.36±0.13），（0.74±0.31)]ng/ml,两组相比妊娠晚期GDM组血清vaspin水平明显低于NGT组(P＜0.01);产后三天vaspin水平均下降，但以GDM组vaspin水平下降明显(P＜0.01);GDM组和NGT组脐血vaspin水平分别为(0.34±0.12)(0.44±0.25)]ng/mL;两组相比无明显区别（P＞0.05）。
　　5、GDM组和NGT组产前及产后三天血清IL-6水平分别为[（358.70±169.39）、(271.21±148.91)]pg/ml和[（271.21±148.91）、(255.16±142.09)]pg/ml。两组相比GDM组血清IL-6水平明显升高(P=0.04);两组产前与产后血清IL-6水平均无明显变化。而GDM组和NGT组脐血IL-6水平分别为[（383.92±213.25）、（336.95±140.70）]pg/ml，两组相比差异无显著性(P＞0.05)。
　　6、相关性分析表明:NGT组，血清vaspin水平与TG、LDL呈正相关(r:0.45，P:0.02; r:0.42，P:0.03)，血清IL-6水平与VLDL呈负相关(r:-0.42，P:0.03)，与FPG正相关。而在GDM组，血清IL-6水平与孕前及孕晚期体重指数呈正相关（r:0.50，P:0.01; r:0.40，P:0.03）。与血清vaspin水平水平呈负相关。
　　结论:
　　1、妊娠晚期GDM患者血清vaspin水平下降，分娩三天后进一步降低。提示vaspin是GDM的保护因子，并主要由胎盘分泌。
　　2、 NGT组，血清vaspin水平与甘油三酯、极低密度脂蛋白呈正相关，提示vaspin可能参与了脂代谢的调控。
　　3、妊娠晚期GDM患者血清IL-6水平升高，支持氧化应激和炎症反应参与GDM的发生这一理论。
　　4、GDM患者血清vaspin水平与IL-6水平负相关，提示两者间具某种联系，IL-6可能对vaspin有抑制作用。
　　第三部分 GDM患者胎盘组织中vaspin的表达
　　目的:测定vaspin、IL-6 mRNA和蛋白在孕晚期GDM及正常妊娠妇女胎盘组织中的表达水平，探讨两者在GDM发病中的作用。
　　方法:于剖宫产术中收集胎盘组织，GDM组、正常妊娠组(NGT)各20例。用荧光定量PCR(real-time FQ RT-PCR)检测胎盘组织vaspin及IL-6mRNA的表达水平，免疫印迹法(Western blotting)检测胎盘组织vaspin及IL-6蛋白的表达水平。
　　结果:
　　1、GDM组和NGT组vaspin mRNA及蛋白表达无明显区别（0.60±0.32vs0.68±0.32,P=0.46;0.30±0.08 vs0.39±0.26,P=0.33）。
　　2、GDM组胎盘组织IL-6 mRNA及蛋白表达明显高于NGT组(1.35±0.67 vs0.82±0.47,P=0.01;1.23±0.25 vs0.54±0.20,P＜0.01)。
　　3、相关性分析表明:胎盘组织vaspin的表达与血清vaspin无明显相关性(P＞0.05);GDM组，vaspinmRNA与糖化血红蛋白呈负相关(r:-0.71，P:0.01)，而与新生儿体质量呈负相关（(r=-0.48，P=0.03;r=-0.88，P＜0.01)，与胎盘组织IL-6 mRNA表达呈负相关关系。
　　结论:
　　1、GDM孕妇胎盘组织vaspin mRNA和蛋白表达与IL-6呈负相关关系。提示IL-6可能参与了vaspin的调节。
　　2、胎盘组织分泌的vaspin可能通过自分泌/旁分泌在胎盘局部发挥作用，并可能参与了GDM时胎儿的生长发育调节。
　　第四部分 IL-6对滋养细胞vaspin表达的影响
　　目的:Vaspin作为一种具有胰岛素增敏作用的脂肪细胞因子，主要由内脏脂肪组织分泌。妊娠时在胎盘表达，其调节机制不明。本研究旨在探讨不同因子作用下BeWo细胞vaspin表达的变化，分析其调控机制。
　　方法:分别以不同浓度的IL-6(1，5，10ng/ml)、葡萄糖(5.5，10，30mmol/L)和吡格列酮(10，100ummol/L)分别作用人绒癌滋养细胞株BeWo细胞12、24、48和72h。留取细胞采用RT-PCR及westemblot检测BeWo细胞中vaspin转录水平和蛋白水平的变化。
　　结果:
　　1、不同浓度的IL-6(1，5，10ng/ml)作用BeWo细胞培养12、24、48、72h后，与空白对照相比，均可抑制BeWo细胞vaspin mRNA和蛋白表达。以IL-6浓度I0ng/ml，作用48h时最明显。而对BeWo细胞中的PPAR-γ mRNA和蛋白表达无明显影响。
　　2、以不同浓度的葡萄糖(5.5，10，30mmol/L)，分别作用BeWo细胞48小时后。均可抑制vaspin和PPAR-γ的mRNA和蛋白表达，且随葡萄糖浓度增加，抑制效果越强。
　　3、以不同浓度的吡格列酮(10，100umol/L)，分别作用于BeWo细胞12h、24h、48和72小时，结果:10umol/L的吡格列酮作用BeWo细胞12h、24h均可明显上调vaspin mRNA的表达（P＜0.05），而100umol/L的吡格列酮在48h反而略有抑制作用(P＜0.05)。10umol/L和100umol/L的吡格列酮作用BeWo细胞12h、24h均可抑制PPAR-γ mRNA的表达（P＜0.05），在48h后谢印制作用消失(P＜0.01，P＜0.05)。
　　结论:IL-6、葡萄糖和吡格列酮均参与滋养细胞vaspin表达的调控，并呈浓度依赖性表现。IL-6、葡萄糖抑制vaspin表达，而吡格列酮则上调vaspin的表达。IL-6对滋养细胞PPAR-γ表达无影响，IL-6可以下调vaspin表达，提示vaspin受炎症因子作用参与GDM的发生和发展。IL-6对vaspin的影响不是通过PPAR-γ途径。滋养细胞vaspin分泌受多种因素调节，可能与氧化应激和炎症反应有关，但其调控的确切机制还需进一步研究。

目录

声明

摘要

英文缩写

引言

第一部分 GDM患者妊娠中期血清vaspin水平

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分 GDM患者妊娠晚期血清及脐血vaspin水平

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分 GDM患者胎盘组织中vaspin的表达

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第四部分 IL-6对滋养细胞vaspin表达的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述 脂肪细胞因子与妊娠期糖尿病研究进展

致谢

个人简历