早期生长反应基因-1的表达与子宫内膜样腺癌之间关系的探讨

摘要

目的：子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma,EC）是来源于子宫内膜的一种上皮性癌，是女性常见生殖系统三大恶性肿瘤之一。据不完全统计，子宫内膜癌约占女性生殖系统恶性肿瘤的25％-30%，严重威胁着广大女性的身心健康。子宫内膜样腺癌为最常见的病理类型，围绝经期妇女和绝经后女性是其好发人群。目前，子宫内膜癌的发病机制尚不十分清楚。子宫内膜癌的发生、发展是一个多因素参与的病理过程。随着分子生物学和免疫学的发展，越来越多的病因学研究集中在多种关键因子或信号通路上，早期生长反应基因-1(Early growth response gene-1，Egr-1)作为一种新发现的肿瘤相关基因受到广泛关注。
　　Egr-1基因属于即刻早期基因家族，是一种具有三锌指结构的核转录因子，广泛存在于从酵母菌到人的真核细胞基因库中，在进化过程中相当保守，多种不同细胞外信号刺激均可诱导其瞬时表达，激活后的Egr-1可与下游基因启动子区域的特异性位点结合，调控基因的转录表达，发挥多种生物学效应。生理情况下，Egr-1基因参与细胞的生长、增殖、分化、凋亡以及组织创伤修复、炎性反应等多种生命活动。近年来，随着国内外学者的深入研究Egr-1基因在肿瘤组织中所起的作用逐渐被发现，多种研究结果已经证实Egr-1基因在肿瘤的发生、发展过程中具有双重作用。在多种肿瘤如胃癌、睾丸胚胎癌等中发现Egr-1基因表达量显著升高；而在卵巢癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌、肝癌等肿瘤组织中表达明显减少甚至缺失。其在肿瘤发生、发展过程中起何种作用取决于其诱导何种蛋白表达以及通过何种信号通路起作用。但是，到目前为止Egr-1基因具体在子宫内膜癌的发生、发展过程中起何种作用尚未报道，Egr-1基因在子宫内膜癌组织中的表达情况亦不十分清楚。因此，本研究运用免疫组化技术和Western Blotting技术检测EGR-1蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达情况，探讨Egr-1在子宫内膜样腺癌发生、发展过程中的作用及意义。
　　方法：
　　1.收集标本：本研究选取2012.01至2016.08在石家庄市第六医院妇科住院的新发子宫内膜样腺癌标本35例为实验组。对照组：不典型增上子宫内膜25例，正常子宫内膜27例。所有标本均经病理学证实，其中子宫内膜样腺癌标本均为原发病例且术前未接受过其他方法治疗，正常子宫内膜标本取自异常子宫出血以及因卵巢良性病变切除子宫，但临床病理证实无子宫内膜病变的患者。
　　2.免疫组化法：取适量收集到的组织标本浸泡于福尔马林溶液中，石蜡包埋，制成石蜡切片，严格按照免疫组化试剂盒（SP法）的实验步骤进行实验，以PBS代替一抗作为阴性对照，以排除假阴性或假阳性结果，以免疫组化阳性细胞数占细胞总数的百分比作为结果判定标准，对实验所得数据进行统计分析，以??????为检验水准，P<0.05有统计学意义。
　　3.蛋白印记（Western Blotting）法：取适量新鲜组织标本，迅速放入-80℃冰箱中保存，待用时取出制成匀浆，提取组织总蛋白，根据BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，严格按照Western Blotting技术的实验步骤进行实验，以EGR-1蛋白条带的灰度值与相应组织中?-actin条带灰度值的比值，即OD值作为统计分析数据，结果以均数±标准差表示，对实验数据进行统计分析，以??????为检验水准，P<0.05有统计学意义。
　　结果：
　　1.免疫组化（SP法）检测Egr-1在三种组织标本中的表达水平。
　　结果显示，在子宫内膜癌组织、子宫内膜不典型增生组织以及正常子宫内膜组织中，EGR-1蛋白阳性颗粒主要分布于细胞核内，部分细胞质中有少量表达，其在正常子宫内膜组织中呈较低水平表达，在不典型增生组织中表达量显著增多，在子宫内膜癌组织中表达量明显减少甚至缺失，三组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。
　　2.Western Blotting法检测Egr-1蛋白在以上三种标本中的表达。
　　EGR-1蛋白在正常子宫内膜组织中的相对表达量为1.47±0.112，不典型增生子宫内膜组织中为4.98±0.720，子宫内膜样腺癌组织中为0.52±0.010。在子宫内膜样腺癌组织中表达量最低，三组间比较Egr-1的表达量存在显著差异（P<0.01）。
　　结论：
　　EGR-1蛋白在正常子宫内膜组织中呈较低水平表达，在不典型增生子宫内膜组织中表达量显著增高，而在子宫内膜癌组织中表达明显减少甚至缺失。推测在组织恶变过程中，机体发动多种机制对抗组织恶变，多种因子共同作用激活Egr-1，使其表达量显著增高，随着机体对抗作用减弱， Egr-1表达量随之减少甚至缺失，组织进一步恶变为癌。Egr-1基因可能具有抑制子宫内膜发生癌变的作用，有可能成为子宫内膜癌治疗的新靶点。

目录

声明

英文缩写

前言

材料与方法

1 实验材料

2 实验步骤

结果

2 Western Blotting法检测Egr-1蛋白在以上三种标本中的表达。

附图

附表

讨论

1 Egr-1基因的生物学功能

2 Egr-1基因在肿瘤中的表达

3 Egr-1基因对子宫内膜癌影响的研究现状及展望

结论

参考文献

综述:Egr-1基因在妇科肿瘤领域的研究进展

致谢

个人简历