土壤中几种农药残留及生物材料中分子信使H2S和神经递质的卫生检测新方法研究

摘要

第一部分：在线固相萃取-高效液相色谱法测定土壤中五种新烟碱类农药残留方法的建立
　　目的：建立在线固相萃取-高效液相色谱同时检测土壤中吡虫啉、啶虫脒、噻虫嗪、噻虫啉、烯啶虫胺五种新烟碱类农药残留的新方法。
　　方法：土壤样品经二氯甲烷：乙腈（19:1，v/v）超声提取，离心后取上清液，氮吹浓缩后复溶进样，PEP固相萃取柱在线净化。使用双梯度液相色谱系统的右泵，以二乙胺水溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱；通过阀切换将保留在固相萃取柱上的待测物转移到分析柱（C18，4.6 mm250 mm，5μm）中进行二次分离，DAD检测器多波长检测，外标法定量。
　　结果：五种农药在0.01~2.00 mg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数均在0.9999以上，检出限0.005~0.010 mg/L（S/N=3）。五种农药在土壤样品中的检出限为0.01~0.02 mg/kg。八种土壤样品0.05、0.10、0.50 mg/kg添加水平的加标回收率分别为72.54％~111.28%，77.99%~110.34%，72.7%~119.42%，相对标准偏差均低于9.64%。
　　结论：该方法操作简单、成本低廉且重现性好，可用于城市公共绿地土壤中五种新烟碱类农药的测定。
　　第二部分：在线净化-高效液相色谱双检测器法同时测定土壤中七种农兽药残留方法的建立
　　目的：建立在线净化-双检测器-高效液相色谱同时检测土壤中磺胺
　　脒、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、烯啶虫胺、吡虫啉、噻虫啉、多菌灵7种农兽药残留的新方法。
　　方法：土壤样品经提取液（甲醇:乙腈:二氯甲烷=5:4:1，v/v/v）提取，氮吹浓缩后直接进样，经在线固相萃取（SPE）柱在线净化，梯度洗脱经反相C18色谱柱分离，二极管阵列（DAD）检测器串联荧光（FLD）检测器检测，外标法定量，12 min内即可完成7种农兽药的检测。
　　结果：7种农药检出限为1.1~3.0×10-3 mg/kg（S/N=3），线性范围内线性相关系数均在0.9999以上。空白土壤样品在0.05、0.10、0.32 mg/kg添加水平的平均加标回收率为71.92%~103.88%，相对标准偏差为0.07%~5.67%。
　　结论：该法操作简便、检测快速，准确度、灵敏度高，适用于土壤中7种农兽药残留的定性和定量。
　　第三部分：柱前衍生-高效液相色谱测定血浆中硫化氢新方法的建立及应用
　　目的：建立柱前衍生-高效液相色谱法测定小鼠血浆中的内源性硫化氢含量的新方法，用以观察百草枯（PQ）中毒小鼠血浆中硫化氢（H2S）水平的变化，初步探讨大蒜素（DATS）作为H2S外源性供体对中毒小鼠进行干预治疗的可能。
　　方法：健康ICR小鼠随机分为4组：正常对照组（第1组）、大蒜素对照组（第2组）、百草枯染毒组（第3组）和大蒜素干预组（第4组）。第3、4组小鼠灌胃给予PQ35 mg/kg建立中毒模型。第2、4组在造模2 h、26 h、50 h后，腹腔注射大蒜素25 mg/kg；第1、3组腹腔注射同体积生理盐水。于末次给药12 h后，麻醉、取血后离心分离血浆。采用传统荧光探针单溴二胺（MBB）的同分异构体MMB对待测血浆样品进行50 ℃避光衍生后，使用Acclaim120 C18 Column（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱进行梯度洗脱，测定小鼠血浆中内源性硫化氢的含量。
　　结果：该方法的衍生产物在0.2~300.0 nmol/mL浓度范围内线性良好(r≥0.999)，最低检测浓度为0.03 nmol/mL，血浆中高中低三水平的加样回收率为94.7%~101.5%，RSD均不大于6.86%。动物实验中，第3组血浆中H2S含量较第1组明显减低(P<0.05)；第4组血浆中H2S含量明显高于第3组(P<0.05)。
　　结论：实验结果表明，与单纯染毒组对比，大蒜素干预后可以抑制百草枯中毒小鼠血浆中 H2S含量的降低。但是尚需要大规模、长疗程的试验来证实大剂量给予大蒜素是否安全以及是否可以作为临床治疗百草枯中毒患者的一种辅助方法。
　　第四部分：高效液相色谱-电化学检测法研究大蒜素对百草枯中毒小鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响
　　目的：建立单胺类神经递质的高效液相色谱-电化学检测方法，用于探讨大蒜素对百草枯中毒小鼠脑组织内的单胺类神经递质及其代谢产物的影响。
　　方法：
　　1.健康ICR小鼠随机分为4组：正常对照（Con）组、大蒜素（DATS）组、百草枯染毒（PQ）组和大蒜素治疗（PQ+DATS）组，每组6只。PQ组灌胃PQ35 mg/kg建立中毒模型，Con组和DATS组灌服同体积生理盐水。DATS组和PQ+DATS组小鼠于造模2 h、26 h和50 h后腹腔内各注射一次DATS（25 mg/kg），PQ组和正常组小鼠腹腔内注射等量无菌生理盐水。造模12 h后处死小鼠。收集小鼠脑组织样品并称重，处理后进样。
　　2.色谱分析采用 Acclaim120 C18 Column（150 mm×2.1 mm，3μm）色谱柱，以离子对缓冲盐溶液-甲醇（93:7，v/v）为流动相，流速为0.27 mL/min；电化学检测器检测，工作电压为450 mV。
　　结果：
　　1.与正常组和 DATS组比较，PQ组部分神经递质水平降低；DATS治疗后能够改变上述生化指标变化；与PQ组相比，PQ+DAS组神经递质含量增高，差异均具有统计学意义（P<0.05）。
　　2.脑组织样品中5-HT、DA、5-HIAA、DOPAC和HVA低、中、高三水平加样回收率均在79.8%~103.0%之间，RSD均不大于10%。
　　结论：本方法检测脑组织中的单胺类神经递质及其代谢产物灵敏、简便。实验表明，大蒜素对百草枯中毒后小鼠体内含量降低的神经递质有明显的上调作用。

目录

声明

英文缩写

第一部分在线固相萃取-高效液相色谱法同时检测城市公共绿 地土壤中五种新烟碱类农药残留方法的建立

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分在线净化-高效液相色谱双检测器法同时测定土壤中七种农兽药残留方法的建立

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第三部分柱前衍生-高效液相色谱测定血浆中硫化氢新方法的建立及应用

前言

材料和方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第四部分高效液相色谱-电化学检测法研究大蒜素对百草枯中毒小鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述:新烟碱类、苯并咪唑类和联吡啶类农药的色谱检测方法研究进展

致谢

个人简历