百合花粉管类整合素生化特性研究

摘要

该室前期工作表明,百合花粉管质膜上可能存在类动物整合素α<,v>β<,3>,并可能通过介导花粉管与雌蕊基质间的相互作用调节花粉管生长.该文设计实验对花粉管类整合素结构特性作了初步研究,为花粉管类整合素α<,v>β<,3>的存在提供进一步证据.提取花粉管质膜囊泡,用含有RGD的六肽包被酶联板,在不同浓度Ca<'2+>或Mg<'2+>存在条件下使花粉管质膜囊泡与RGD三肽结合,甲苯胺蓝染色,以此判定结合的蛋白量. 发现在Ca<'2+>浓度达到100mM时,与RGD肽结合的蛋白量高于对照组RAD;在不同浓度Mg<'2+>存在下,与RGD肽结合的蛋白量一直低于对照组RAD.从这一结果推测花粉管类整合素与RGD肽的结合可能是依赖Ca<'2+>的.但由于所测数据一直很低,可能在仪器的误差范围内,还不能最后确定类整合素与RGD三肽结合是否具有特异性.进行了微粒体糖蛋白提纯及其免疫印迹检测.所用整合素α<,v>β<,3>抗血清主要识别动物α<,v>亚基,用整合素α<,v>β<,3>抗血清和整合素β<,3>亚其胞质域抗血清无论是还原条件还是非还原条件都检测到分子量一致的带,推测它们可能都是类整合类α<,v>β<,3>的复合物.糖蛋白的免疫沉淀结果显示:100KD的类整合素复合物可能是依赖二价阳离子的;70KD的类整合素复合可能是不依赖二价阳离子的.上述结果表明,百合花粉管中存在类整合素,并可能有依赖二价阳离子和不依赖二价阳离子两种不同类型的类整合素复合物.

目录

缩写表

摘要

Abstract

文献综述

一、动物整合素研究进展

(一)整合素的家族结构特性

(二)整合素参与的信号转导途径

(三)整合素的功能特性

二、植物类整合素研究进展

(一)类动物胞外基质成分的鉴定

(二)植物和真菌类整合素的研究

前言

材料与方法

一、实验材料

二、抗体与试剂

三、实验方法

1.花粉的萌发

2.花粉管微粒体及质膜囊泡的制备

3.花粉管质膜囊泡纯度检测

4.质膜蛋白浓度的测定

5.RGD肽结合特性分析

6.微粒体糖蛋白的纯化

7.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)

8.类整合素蛋白的免疫印迹检测

9.免疫沉淀

实验结果与分析

—、百合花粉管质膜囊泡的制备和纯度检测

二、RGD肽结合特性分析

三、糖蛋白的纯化

四、整合素的免疫印迹

五、免疫沉淀

讨论

一、类整合素与RGD肽结合特性分析

二、糖蛋白的纯化与免疫印迹检测

三、花粉管类整合素的结构特性初探

结论

参考文献

附录

个人简历

致谢