马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析及对嘧菌酯和精甲霜灵的敏感性测定

摘要

马铃薯晚疫病由假菌界卵菌门中的致病疫霉引起，是世界范围内马铃薯生产上最具毁灭性的病害。本研究利用两对SSR引物分析了河北围场，崇礼和黑龙江克山晚疫病菌的SSR基因型，同时测定了马铃薯晚疫病菌的交配型及其对嘧菌酯和精甲霜灵的敏感性，主要研究结果如下。 1.利用两对SSR引物Pi4B和Pi4G对2006～2007年采自河北围场和崇礼、黑龙江克山共计171株马铃薯晚疫病菌株进行基因型鉴定，共鉴定出5种SSR基因型:F-01、F-02、F-05、F-06和G-03。其中，G-03是首次报道的新的SSR基因型。 2.经鉴定河北围场和崇礼的107株菌株分属于3种SSR基因型，分别是F-01、F-05和F-06，其中，101株菌株为F-01基因型，占群体的94.4％，居绝对优势。黑龙江克山的64株菌株分属于5种SSR基因型，分别是F-01、F-02、F-05、F-06和G-03，其中，35株菌株为F-01基因型，23株菌株为F-06基因型，各占群体的54.7％和35.9％，这两种基因型占群体多数。 3.测定了2006年河北围场、黑龙江克山、2007年河北围场和崇礼共计207株马铃薯晚疫病菌的交配型。结果表明，所有菌株全部为A1交配型，未发现A2交配型。 4.测定了2006年采自河北围场、黑龙江克山、2007年河北围场和崇礼共计207株马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯的敏感性水平，结果所有被测晚疫病菌株均表现为敏感。2006年围场和克山马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯的平均EC50值分别为0.0745±0.00331μg/mL和0.0766±0.0041μg/mL，2007年围场和崇礼马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯的平均ECso值分别为0.0612±0.0049μg/mL和0.0628±0.0039μg/mL，207株马铃薯晚疫病菌株的平均ECso值为0.0715±0.0023μg/mL，该值可作为今后马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯抗药性监测的敏感性基线。 5.分别测定了2006年采自河北围场30株、2006年采自黑龙江克山30株、2007年采自河北围场22株和河北崇礼8株马铃薯晚疫病菌对精甲霜灵的敏感性。结果表明90株晚疫病菌中敏感、中抗和高抗菌株的比例分别为58.9％、32.2％和8.9％，对精甲霜灵最敏感菌株ECso值为0.0063μg/mL，对精甲霜灵最高抗性菌株ECso值为169.7991μg/mL，最高抗性菌株EC50值是最敏感菌株EC50值的26952倍。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

1.1马铃薯晚疫病的发生

1.2马铃薯晚疫病菌A2交配型的研究

1.3马铃薯晚疫病菌抗药性的研究

1.3.1马铃薯晚疫病菌对甲霜灵的抗性问题

1.3.2目前防治晚疫病菌常用的药剂及其敏感性研究

1.4马铃薯晚疫病菌群体遗传多样性及主要分子标记技术

1.4.1 RFLP标记

1.4.2 RAPD标记

1.4.3 SCAR标记

1.4.4 AFLP标记

1.4.5 SSR标记

1.5本研究的目的与意义

2材料与方法

2.1试验材料及仪器

2.1.1供试马铃薯晚疫病菌菌株

2.1.2供试培养基

2.1.3供试主要试剂

2.1.4主要仪器设备

2.1.5 SSR引物

2.2马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析

2.2.1基因组DNA的提取

2.2.2 DNA纯度与浓度的检测

2.2.3 SSR反应体系和扩增程序

2.2.4聚丙烯酰胺凝胶的制备及电泳

2.2.5聚丙烯酰胺凝胶的银染

2.2.6 DNA扩增条带的统计与分析

2.2.7马铃薯晚疫病菌SSR基因型划分标准

2.3马铃薯晚疫病菌交配型的测定

2.4马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯敏感性测定

2.5马铃薯晚疫病菌对精甲霜灵的敏感性测定

2.6马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯和精甲霜灵的敏感性划分标准

3结果与分析

3.1马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析

3.1.1晚疫病菌基因组DNA提取

3.1.2扩增结果

3.1.3马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析

3.2马铃薯晚疫病菌交配型测定结果

3.3马铃薯晚疫病菌对嘧菌酯的敏感性测定结果

3.4马铃薯晚疫病菌对精甲霜灵的敏感性测定结果

4讨论

4.1马铃薯晚疫病菌的SSR分子标记

4.2马铃薯晚疫病菌的交配型

4.3晚疫病菌对嘧菌酯的敏感性

4.4晚疫病菌对精甲霜灵的敏感性

4.5杀菌剂的合理利用

4.6今后的工作设想

5结论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文

作者简历

致谢