防治黄瓜细菌角斑病的中草药提取物的筛选与研究

摘要

首先用平板琼脂打孔法对30种中草药提取物进行了初筛，得到3种对黄瓜细菌角斑病菌有较强抑制作用的提取物，分别为五倍子、丁香和地榆的提取物。其中五倍子提取物(4000mg/L)的抑菌圈直径为15.8mm，与化学药剂对照72％农用硫酸链霉素(100mg/L)的抑菌效果在同一水平。用液体培养法测得三种提取物对黄瓜细菌角斑病菌的抑制中浓度(EC50)分别为13.46mg/L，19.75mg/L和36.80mg/L。在活体上测试了它们对黄瓜细菌角斑病的保护作用和治疗作用。结果表明，只有五倍子提取物具有较强的保护作用，防效可达63.93％。综合上述试验结果，选取五倍子提取物作为进一步研究的对象。 用五倍子提取物对分离得到的黄瓜细菌角斑病菌不同菌株进行了最低杀菌浓度(MBC)的测定，其中五倍子提取物对PSL-F2和PSL-F3菌株的MBC为1.0mg/mL；对PSL-8(标准菌株)，PSL-F5和PSL-F6菌株的MBC为2.0mg/mL，对PSL-2，PSL-F1和PSL-F4菌株的MBC大于4.0mg/mL，。结果表明不同菌株对五倍子提取物的敏感程度不同。 对五倍子提取物的热稳定性、酸碱稳定性进行了测试。结果表明，五倍子提取物除在121℃处理后，抑菌活性有增强外，在-20℃～100℃处理后，抑菌活性没有显著的变化。五倍子提取物的酸碱稳定性表现为:在酸性和弱碱条件下(pH=2～8)，抑菌活性稳定；在碱性较强的条件下(pH=10～14)其稳定性较差，其抑菌活性有明显的降低。 通过测定五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌生长曲线及呼吸代谢的影响，对其抑菌机理进行初步研究。生长曲线试验结果表明，五倍子提取物能够抑制黄瓜细菌角斑病菌菌体在对数生长期的增长，可能是抑制了菌体的分裂。而呼吸代谢抑制试验结果显示:五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌呼吸代谢的糖酵解途径(EMP)、三羧酸循环(TCA)、磷酸戊糖途径(HMP)均表现出不同程度的抑制作用，而对TCA途径的抑制作用是最主要的。

目录

文摘

英文文摘

声明

1引言

2材料与方法

2.1供试材料

2.1.1供试中草药

2.1.2供试菌株

2.1.3黄瓜品种

2.1.4化学药剂

2.1.5仪器及试剂

2.2方法

2.2.1黄瓜细菌角斑病菌浓度的测定

2.2.2中草药乙醇提取物的制备

2.2.3中草药乙醇提取物抑菌活性的初步测定

2.2.4中草药提取物对黄瓜细菌角斑病菌的抑制中浓度(EC50)的测定

2.2.5离体叶片法对五倍子、丁香和地榆提取物抑菌作用的验证

2.2.6五倍子提取物对分离得到的不同菌最小杀菌浓度(MBC)的测定

2.2.7五倍子提取物稳定性的测定

2.2.8五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌生长曲线的影响

2.2.9五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌呼吸代谢的影响

2.3数据统计分析

3结果与分析

3.1黄瓜细菌角斑病菌浓度的测定

3.1.1黄瓜细菌角斑病菌在无菌水中浓度的测定

3.1.2黄瓜细菌角斑病菌在KB培养液中浓度的测定

3.2中草药有效成分的提取率及抑菌作用的测定

3.2.1中草药有效成分的提取率

3.2.2 30种中草药乙醇提取物对黄瓜细菌性角斑病菌的抑菌效果

3.3五倍子、丁香、地榆提取物对黄瓜细菌性角斑菌的抑制中的浓度

3.4离体叶片法对五倍子、丁香、地榆抑菌作用的验证结果

3.5五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌不同菌株的最低杀菌浓度(MBC)

3.5.1黄瓜细菌角斑病菌不同菌株的分离

3.5.2五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌不同菌株MBC的测定

3.6五倍子提取物的稳定性

3.6.1温度对五倍子提取物抑菌活性的影响

3.6.2 pH对五倍子提取物抑菌活性的影响

3.7五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌生长曲线的影响

3.8五倍子提取物对黄瓜细菌角斑病菌呼吸代谢的影响

4讨论

4.1关于快速测定细菌浓度方法的探讨

4.2筛选具有抑菌活性物质的方法

4.3五倍子抑菌作用及抑菌机理研究中存在的问题

4.4对今后研究的建议

5结论

参考文献

附录

在读期间发表的学术论文

作者简介

致谢