利用AFLP分子标记技术探讨部分竹类植物属间亲缘关系

摘要

竹子是一种重要的经济作物，属禾本科，是重要的森林资源。但由于分类标准不统一，分类手段的局限性，导致了分类结果的不一致。AFLP(Amplified Fragment LengthPolymorphism)分子标记具有高效、稳定、可靠的特点，已广泛应用于品种鉴定、遗传多样性分析等方面。本实验利用AFLP 技术对35个竹子品种进行了多态性分析和聚类比较，旨在为竹子的分类地位提供必要的依据。研究结果如下：
　　 1、通过对植物基因组总DNA的提取方法的比较和改进，得到了一种适合竹子总DNA 提取的方法——改良SDS法。运用该方法进行竹子叶片DNA的提取能提出适合AFLP 标记技术所需的高质量DNA。
　　 2、通过对竹子AFLP 反应体系进行系统研究，建立了适于竹子AFLP分析的最佳体系。600ng DNA 用10U/μL的EcoR I和Mse I 在37℃ 3h，65℃ 3h的条件下进行双酶切，然后加入10μL 连接混合液16℃连接过夜；预扩增取连接产物5μL，EcoR I和MseI（20U/μL）各0.6μL，10倍buffer 2μL，dNTPs 2μL，ddH2O 补到20μL；取5μL 稀释20倍后的预扩增产物,20U/μL EcoR I和Mse I 选扩引物各0.6μL，总体积20μL 进行选择性扩增。在此优化条件下，可以得到重复性好、稳定性且多态性高的竹子AFLP条带。
　　 3、筛选出10 对具多态性和清晰度都较高的引物组合用于材料分析。共扩增出可统计条带872条，平均每对引物扩增带数为87条，其中多态性条带为836条，多态性位点的比例是95.87％；35个竹子品种间的遗传相似系数在0.528-0.936之间。
　　 4、对AFLP数据进行聚类分析，构建了竹子的UPGMA系统树，以遗传距离0.403为分类界限,35个供试品种大致可以聚为两类。

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1 引言

2 材料与方法

3 结果与分析

4 讨论

5 结论

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