宁夏枸杞提取物初步分离鉴定及功效研究

摘要

宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)一般被称为枸杞子，为茄科植物枸杞的成熟果实，其含有多种氨基酸，以及玉蜀黍黄素、甜菜碱、酸浆果红素等不常见的特殊营养成分，具有非常好的保健功效。宁夏枸杞药食同源历史悠久，是驰名中外的名贵中药材。中医常以枸杞入药，因其具有良好的降血压、明目、抗氧化、抗衰老、抗辐射、抗肿瘤、降血压、降血脂等药效，同时枸杞还被广泛应用于保健品、食品、化妆品、医药等领域，具有广泛的应用开发价值。
　　目前宁夏枸杞的研究多集中在多酚、黄酮、多糖等成分的研究，对于宁夏枸杞提取物的研究较少，但研究单种天然成分的功效给全面综合认识宁夏枸杞提取物的功能活性带来一定的局限性。本课题旨在研究宁夏枸杞中活性物质的分离提取，分析宁夏枸杞中活性成分的种类，为进一步提高宁夏枸杞利用率提供参考。
　　(1)宁夏枸杞活性物质的萃取及成分研究。选取优质宁夏枸杞果实，采用甲醇提取宁夏枸杞中主要活性成分，使用正丁醇，乙酸乙酯萃取，得到水层(LBWE)、乙酸乙酯层(LBEAE)、正丁醇层(LBNAE)的样品。利用UPLC-Q-TOF/MSE分析各层样品，观察色谱图与3D图，发现正丁醇层样品峰与峰之间分离程度最优，活性物质种类丰富，故选取正丁醇层样品进一步分离分析。
　　(2)大孔树脂再分离及质谱分析。使用大孔树脂进行再分离，不同浓度乙醇水溶液进行梯度洗脱，得到不同级分LBBE，分别为30％LBBE、50％LBBE、70％LBBE、95％LBBE。使用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MSE)对不同级分LBBE进行分析，发现其天然成分种类有所减少，种类与含量各不相同，这可能与其生理活性相关，需进一步对其生理活性进行评价。
　　(3)宁夏枸杞活性物质抗氧化性研究。采用DPPH法、羟基自由基清除法、测定并比较不同级分LBBE样品的抗氧化活性强弱。DPPH试验结果表明，70％乙醇水洗脱下来的LBBE具有更强的抗氧化能力。羟基自由基及清除试验表明，50％乙醇水洗脱下来的LBBE具有更强的抗氧化能力。
　　(4)宁夏枸杞活性物质抑菌效果研究。探究其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母的抑制作用，发现30％LBBE样品对于大肠杆菌的抑制效果并不明显，对金黄色葡萄球菌与啤酒酵母有抑菌效果。50％LBBE对大肠杆菌的抑制效果不明显，但是对金黄色葡萄球菌的抑制作用很强，对啤酒酵母没有抑制效果。70％LBBE与95％LBBE对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌都有不同程度的抑制作用，对啤酒酵母没有抑制效果。
　　本实验旨在研究宁夏枸杞提取物的体外抗氧化性及抑菌性，现阶段对于宁夏枸杞的研究主要集中在多糖、黄酮、多酚等成分，对于宁夏枸杞提取物的研究较少，宁夏枸杞提取物的研究为物质成分的研究提供新的前景，对于物质成分的研究不再限于单种成分。

目录

声明

摘要

缩略表

1．1 目的意义

1．2 国内外研究进展

1．2．1 宁夏枸杞研究背景

1．2．2 宁夏枸杞成分组成

1．2．3 宁夏枸杞的功效

1．2．4 宁夏枸杞中其他活性物质的研究进展

1．2．5 宁夏枸杞的发展前景

1．2．6 宁夏枸杞提取物及发展前景

1．3 存在的主要问题

1．3．1 宁夏枸杞提取物的提取分离方法

1．3．2 产品开发问题

1．4 本研究的主要内容

1．4．2 常用活性组分分析技术-飞行时间质谱(TOF)

1．4．3 活性组分抗氧化能力评价方法

1．4．4 活性组分抑菌试验

1．4．5 研究内容和技术路线

2．1 前言

2．2 材料与仪器

2．2．1 试验材料

2．2．2 试验设备

2．3 试验方法

2．4 结果与讨论

2．4．1 LBCE物质的鉴定

2．4．2 LBWE物质的鉴定

2．4．3 LBEAE物质的鉴定

2．4．4 LBNAE物质的鉴定

2．5 小结

3 宁夏枸杞提取物的再分离及分析

3．3 试验方法

3．4 结果与讨论

3．4．1 大孔吸附树脂的选择

3．4．2 30％LBBE物质的鉴定

3．4．3 50％LBBE物质的鉴定

3．4．4 70％LBBE使用UPLC-Q-TOF／MSE处理

3．4．5 95％LBBE物质的鉴定

3．5 小结

4．1 前言

4．2 试验材料与试剂

4．2．1 试验材料

4．2．2 试验设备

4．3 试验方法

4．4 结果与讨论

4．4．1 DPPH自由基清除能力的测定

4．4．2 羟基自由基清除能力测定

4．4．3 ABTS法测定抗氧化能力

4．5 小结

5 宁夏枸杞提取分离物质的抑菌试验

5．3 试验方法

5．4 结果与讨论

5．4．1 30％LBBE抑菌效果

5．4．2 50％LBBE抑菌效果

5．4．3 70％LBBE抑菌效果

5．4．4 95％LBBE抑菌效果

5．5 小结

6 结论

参考文献

作者简介

致谢