家禽副产物酶解肽在凡纳滨对虾饲料中的应用研究

摘要

为了研究家禽副产物酶解肽（peptides hydrolyzed from poultry by-products，PHFP）替代凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）饲料中部分鱼粉的可行性，本实验通过PHFP对鱼粉的替代量实验、不同形式蛋氨酸添加实验以及对虾肝胰腺蛋白质组学分析三部分实验对凡纳滨对虾饲料中PHFP的应用进行了研究。
　　主要研究方法与具体结果如下:
　　实验一:以预混PHFP（在PHFP基础上添加包膜蛋氨酸，使其蛋氨酸含量与国产鱼粉相当）分别替代基础饲料中0（对照）、2％、4％、6％、8％的鱼粉，制作5种实验饲料并命名T0、T1、T2、T3、T4。选取900尾平均体重（0.31±0.01）g的凡纳滨对虾，随机分为5组，每组3个重复，每个重复60尾，进行为期8周的室内养殖实验。结果表明:替代水甲为2％～6％时，对虾的增重率(WGR)、特定生长率(SGR)、蛋白质效率(PER)、饲料系数(FCR)与对照组无显著差异（P＞0.05）;当替代水平超过2％时，全虾粗脂肪含量显著低于对照组(P＜0.05)，全虾粗灰分含量显著高于对照组（P＜0.05）;替代水平为2％时，肝胰腺中脂肪酶(LPS)活性最高，并可显著降低血淋巴中葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TG)的含量(P＜0.05)，显著提高血淋巴中溶菌酶(LZM)的活性(P＜0.05)。当替代水平超过2％时，血浆中过氧化物酶(POD)的活性显著低于对照组（P＜0.05）。各组粗蛋白质表观消化率、粗脂肪表观消化率以及肝胰腺中LZM活性、POD活性与总抗氧化能力(T-AOC)均无显著差异（P＞0.05）。由此得出，在本实验条件下，以生长性能为基础，综合考虑消化、非特异性免疫等指标，包膜蛋氨酸预混PHFP替代凡纳滨对虾饲料中鱼粉的适宜水平为2％。
　　实验二:研究了添加晶体蛋氨酸预混的PHFP替代对虾饲料中2％的鱼粉组与对照组和添加包膜蛋氨酸预混的PHFP替代对虾饲料中2％的鱼粉组对对虾生长的影响，分别记做P0(对照)，P1（包膜蛋氨酸），P2（晶体蛋氨酸）组。实验结果表明，P2组对虾WGR、SGR、PER等指标略高于P1和P0组，组间无显著性差异(P＞0.05);P2组全虾脂肪和肌肉脂肪显著低于P0和P1组（P＜0.05），全虾灰分显著高于P0和P1组(P＜0.05);P1组胃蛋白酶(PPS)活性显著低于P0组（P＜0.05），与P2组无显著性差异（P＞0.05）;各组消化酶活性和营养物质表观消化率指标没有显著性差异(P＞0.05);P1、P2组血淋巴中TG、GLU、AST、ALT浓度均低于P0组，但不构成统计学上的差异(P＞0.05);对虾肝胰腺中ALP活性P1组显著低于P0组和P2组，其他免疫指标无显著性差异(P＞0.05);血淋巴中POD活力P2组显著低于P1组和P0组(P＜0.05)，但T-AOC显著高于P1组和P0组(P＜0.05)，P1、P2组LZP活力略高于P0组，但无显著性差异(P＞0.05)。由此得出，以生长性能为基础，综合考虑消化、非特异性免疫等指标，晶体蛋氨酸预混PHFP替代凡纳滨对虾饲料中2％鱼粉更优。
　　实验三:将实验二中的生长最优组P2和对照组P0组对虾肝胰腺进行了Label-free定量蛋白质谱分析分别记作V(P2)组和C(P0)组。结果表明，V组较C组对虾肝胰腺共有蛋白中有15蛋白个表达上调，3个蛋白（肌动蛋白T2，骨骼肌肌动蛋白6和α-葡糖苷酶）表达下调，表达上调蛋白分别为胰蛋白酶、丝氨酸胶原酶1、丝氨酸蛋白酶抑制剂3、水通道蛋白4、钙网蛋白、四跨膜蛋白、抗白细胞蛋白酶，微管蛋白α链、整合素β亚基、NADH泛醌氧化还原酶亚基3、钙转运ATP酶、Fo-ATP合成酶B链、α-淀粉酶，几丁质酶、果糖-1，6-二磷酸酶，分别涉及了在碳水化合物代谢、能量代谢、离子转换、抗炎抗菌以及信号传导等过程，彼此相互依存、相互制约共同促进对虾的生长。从分子水平讲，PHFP搭配一定晶体蛋氨酸替代对照组对虾饲料中2％的鱼粉具有可行性。

目录

声明

摘要

1引言

1．1凡纳滨对虾的养殖概况

1．2凡纳滨对虾的营养需求

1．2．1蛋白质和氨基酸

1．2．2脂类

1．2．3糖类

1．2．4维生素

1．2．5矿物元素

1．3功能肽蛋白饲料的应用

1．3．1小肽／寡肽的吸收机制和功能特点

1．3．2提高蛋白质的合成利用率，促进水产动物生长

1．3．3增强免疫力和抗氧化能力

1．3．4提高饲料的诱食作用

1．3．5饲料防腐和促进矿物元素吸收

1．3．6功能肽作为饲料蛋白源

1．4家禽副产物在饲料中的应用

1．4．1家禽副产物研究现状

1．4．2家禽副产物在畜禽中的应用

1．4．3家禽副产物在水产中的应用

1．4．4家禽副产物蛋白源存在问题及展望

1．5蛋白质组学技术在对虾研究中的应用

1．5．1蛋白组学研究进展

1．5．2对虾蛋白质组学研究

1．6研究目的与意义

1．7研究方法、内容和技术路线

2 PHFP添加包膜蛋氨酸对凡纳滨对虾生长性能、消化指标和非特异性免疫指标的影响

2．1材料与方法

2．1．1实验饲料

2．1．2饲养管理

2．1．3样品的采集与指标测定方法

2．1．4实验结果统计分析

2．2．1 PHFP对凡纳滨对虾生长性能的影响

2．2．2 PHFP对凡纳滨对虾体成分影晌

2．2．3 PHFP对凡纳滨对虾血淋巴中生化指标的影响

2．2．4 PHFP对凡纳滨对虾消化指标的影响

2．2．5 PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺中消化酶活性的影响

2．2．6 PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺中磷酸酶活性的影响

2．2．7 PHFP对凡纳滨对虾LZM活性的影响

2．2．8 PHFP对凡纳滨对虾POD活性的影响

2．2．9 PHFP对凡纳滨对虾T-AOC的影响

2．3讨论

2．3．1 PHFP对凡纳滨对虾生长、摄食、体成分的影响

2．3．2 PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶及营养物质表观消化率的影响

2．3．3 PHFP对凡纳滨对虾血淋巴生化指标的影响

2．3．4 PHFP对凡纳滨对虾抗氧化酶指标的影响

2．3．5 PHFP对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响

2．4小结

3不同形式蛋氨酸预混PHFP在凡纳滨对虾饲料中的应用研究

3．1材料方法

3．1．1实验饲料

3．1．2饲养管理

3．1．3样品的采集与指标测定

3．1．4实验结果统计分析

3．2实验结果

3．2．1不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾生长指标的影响

3．2．2不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾体成分影响

3．2．3不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾血淋巴中生化指标的影响

3．2．4不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾消化指标的影响

3．2．5不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺中消化酶活性的影响

3．2．6不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺中磷酸酶活性的影响

3．2．7不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾肝胰腺中消化酶活性的影响

3．2．8不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中POD活性的影响

3．2．9不同形式蛋氨酸预混PHFP对凡纳滨对虾血浆和肝胰腺中T-AOC的影响

3．3讨论

3．3．1 PHFP搭配不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾生长、摄食、体成分的影晌

3．3．2 PHFP搭配不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾消化指标的影响

3．3．3 PHFP搭配不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾血浆生化指标的影响

3．3．4 PHFP搭配不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾抗氧化指标的影响

3．3．5 PHFP搭配不同形式蛋氨酸对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响

3．4小结

4．1．2样品的采集

4．1．3蛋白提取

4．1．4蛋白定量(Bradford)

4．1．6 Trypsin酶解

4．1．7质谱分析

4．1．8实验结果统计分析

4．2实验结果

4．2．1蛋白定量

4．2．2肝胰腺蛋白SDS-PAGE电泳

4．2．3肽段长度分布

4．2．4鉴定总蛋白数

4．2．5鉴定差异蛋白数

4．2．6生物信息学分析

4．3讨论

4．3．1差异蛋白分析

4．3．2生物信息学分析

4．3．3蛋白质组学与生长、免疫的关联分析

4．4小结

5结论

6展望

参考文献

硕士期间发表论文

作者简介

致谢