Dp44mT、顺铂及二者联合对人肝癌细胞株HepG2抑制作用机制研究

摘要

癌症（cancer）是一种全身消耗性疾病，尽管经过几十年的研究，在发达国家仍然是导致死亡的主要原因。然而就大多数肿瘤而言，单一的某种治疗方法，其疗效均不甚理想，多需要多种方法的综合治疗。化学治疗（化疗）是手术以外的重要治疗手段，然而其主要限制是无法区分健康细胞和肿瘤细胞，不可避免的会产生一系列的副作用，如恶心、呕吐、食欲减退、脱发、肝肾损伤、骨髓抑制，甚至会诱发癌变。因此，寻找到抗肿瘤效果佳、副作用低、耐受性好的药物及化疗方案是临床工作及科学研究的重点及热点。近些年，众多研究显示二-2-吡啶酮-4,4-二甲基-3-氨基硫脲（Dp44mT）具有广谱、高效的抗肿瘤活性。然而关于Dp44mT和顺铂的联合用药，特别是作用于人肝癌细胞株HepG2的研究及相关实验鲜有报道。本实验将对Dp44mT、顺铂两药单独以及联合用药对人肝癌细胞株HepG2的抑制情况及相关机制进行研究。 目的： 探讨Dp44mT、顺铂及其联合用药对人肝癌细胞株的生长抑制情况，并研究其可能的作用机制。 方法： 对人肝癌HepG2细胞株进行人工体外培养，待细胞处于对数生长期时进行实验，对实验进行分组：对照组、Dp44mT组、顺铂组、顺铂联合Dp44mT组。 1.使用倒置显微镜观察细胞形态；以凋亡细胞琥珀酸脱氢酶活性检测法（MTT法）测肿瘤细胞（HepG2）的生长抑制率，并计数半数抑制浓度（IC50）； 2.体外活性氧方法评估Dp44mT、顺铂两药单独及联用时产生ROS能力； 3.细胞内活性氧方法检测Dp44mT、顺铂两药单独及联用在HepG2细胞株内产生ROS能力； 4.单细胞电泳（彗星尾）法评估Dp44mT、顺铂两药单独及联用对人肝癌细胞株HepG2细胞DNA的损伤。 5.运用流式细胞仪测得Dp44mT、顺铂两药单独及联用对人肝癌细胞株HepG2细胞周期的影响。 结果： 1.Dp44mT、顺铂两药单独及联合应用均能明显抑制人肝癌HepG2细胞株的生长，且抑制作用与药物浓度呈正相关，与对照组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）； 2.细胞外活性氧方法检测出Dp44mT组、顺铂组、顺铂联合Dp44mT组、Dp44mT+VitC组、顺铂+VitC组、顺铂+Dp44mT+VitC组均有产生细胞外活性氧的能力，且以顺铂+Dp44mT+VitC组能力最强； 3.细胞内活性氧方法检测出Dp44mT组、顺铂组、顺铂联合Dp44mT组均有产生细胞内活性氧的能力；且联合用药产生ROS能力强于单独用药。 4.单细胞电泳（彗星尾）法检测出Dp44mT与顺铂单独用药组均有彗星尾出现，且联合用药生产彗星尾最长、头最小； 5.顺铂单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在G1期；Dp44mT单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在S期；两药联合应用可使人肝癌细胞株HepG2的细胞周期停滞在S期，顺铂可以增强Dp44mT对细胞周期阻滞的能力，并且随顺铂浓度降低，Dp44mT对细胞周期的抑制作用增强，成负相关关系。 结论： 1.Dp44mT、顺铂两药单独用药均能抑制人肝癌HepG2细胞株的生长，且抑制作用与药物浓度呈正相关，两药联用表现出协同或相加作用。 2.Dp44mT、顺铂两药单独和联合使用在细胞内外均能产生ROS，且联合用药作用强于单独用药。它们引起的DNA损伤与ROS形成能力相关，表明它们对HepG2细胞的生长抑制是由ROS介导的。 3.顺铂单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在G1期；Dp44mT单独用药可使人肝癌HepG2细胞株细胞周期停滞在S期；两药联合应用可使人肝癌细胞株HepG2的细胞周期停滞在S期，顺铂可以增强Dp44mT对细胞周期阻滞的能力，并且随顺铂浓度降低，Dp44mT对细胞周期的抑制作用增强，成负相关关系。总之它们的生长抑制作用于ROS及细胞周期停滞有关，表明它们的抗肿瘤活性涉及多种机制参与。

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