胃癌组织中HER2基因扩增与化疗药物敏感性标志物联合检测及意义

摘要

据《2015年中国癌症统计报告》最新数据显示，胃癌在中国的发病及死亡率均排名第二位[1]。世界范围内，胃癌的发病呈现逐年递增的趋势，每年大量的新发胃癌数据中，有大约60%发生在中国。中、日、韩三国胃癌发病占世界胃癌发病总数的70%左右。胃癌的死亡率就目前世界范围内在各种肿瘤中排名第二位。胃癌的发病原因至今未得到明确，但与胃癌发生发展关系较为密切的高危因素包括饮食、环境、感染、遗传易感性及基因等均已得到多方研究证实[2-6]。外科手术切除在胃癌发病初期常被作为最佳治疗手段，但由于疾病的早期筛查未能及时到位及民众较薄弱的认知使得早期胃癌检出率极低，所谓的进展期即中晚期胃癌在胃癌的整体就诊率上占绝大部分，多数已错过手术最佳时机，需要辅助各种综合治疗手段包括化疗、放疗、热疗、免疫治疗、中医中药治疗等，全身化疗虽为其主要治疗措施，但大量Meta分析结果显示该措施虽可延长生存时间，效果依然达不到理想的预期，有关数据显示中国中期或晚期胃癌根治术后五年生存率大约为20%。2016版《胃癌HER2检测指南》提到ToGA及HerMES均已证实抗HER2靶向药物曲妥珠单抗治疗HER2阳性晚期胃癌的疗效。2015年NCCN指南已将多西他赛联合顺铂和氟尿嘧啶（DCF）方案列为晚期胃癌化疗一线方案。人类基因组计划的实现，无疑是给“精准医学”时代背景下的胃癌患者带来了更多的生的希望，分子靶向治疗体系的日渐成熟，实质上是得益于分子生物学、基因组学从实验室走向临床一线的大跨越，彻底改变了以往单一、粗略的治疗模式，逐渐进入以分子靶向治疗为基础的个体化治疗时代。通过对不同个体相关标记物的检测，针对不同个体选择分子靶向药物与化疗敏感药物联合应用,在患者的疾病进展时间和总体生存期上都可以得到更好的延长。人EGFR受体超家族成员之一的II型表皮生长因子受体HER2作为乳腺癌靶向治疗及预测预后的重要标记物已被广泛认可，除此之外该受体在除乳腺癌之外的其他部位恶性肿瘤中均有被发现的记录，主要包括：卵巢癌、结直肠癌、肺癌等，Ⅱ型表皮生长因子受体HER2同样也存在于胃癌组织中，HER2基因扩增可以作为胃癌运用靶向药物治疗的有效靶点，HER2蛋白的过表达与胃癌的预后之间也存在密切关系。胃癌化学药物治疗中存在的耐药问题同样是影响胃癌预后的重要因素，铂类抗肿瘤药物与ERCC1基因；氟尿嘧啶类抗肿瘤药物与TYMS基因；紫杉醇类抗肿瘤药物与TUBB3基因，三类化疗药物分别对应的三组基因间也有着密不可分的关系，在胃癌患者个体化的化学药物治疗中发挥着至关重要的作用，通过运用实时荧光定量PCR即qRT-PCR技术分别检测ERCC1、TUBB3、TYMS基因mRNA表达水平，选择对应组化学药物，分别为DDP（C）、Docetaxel（D）和5-FU（F）组成临床常用的化疗方案DCFf，多基因联合检测在胃癌患者化学药物治疗中选择药物方面可以更有针对性，提高治疗疗效。靶向药物与化疗敏感药物在单独用于胃癌的治疗中有着惊人的效果，然而，靶向药物与化疗敏感药物联合应用是否会在疾病的治疗与预后方面的效果优于两者单纯的治疗，本文就此来做进一步的探究，本研究采用免疫组织化学染色方法（immunohistochemistry,IHC）检验胃癌组织中HER2蛋白表达、荧光原位杂交（fluoresce in situ hybridization,FISH）检验胃癌组织中HER2基因情况，实时定量PCR（realtime quantitative PCR,qRT-PCR）检验胃癌常用化疗药物氟尿嘧啶类、铂类和紫杉类敏感性标志物的mRNA表达水平，探讨FISH、IHC、qRT-PCR技术对于胃癌检测结果的判读标准，为抗肿瘤药物在治疗过程中患者能够更好的受益提供精准的参考指标，为个体化治疗提供理论依据。 目的：探讨胃癌组织中HER2基因扩增与三类化疗药物敏感性标志物联合检测及意义。 方法：收集河南省洛阳市解放军第150中心医院病理科于2011年2月至2013年9月胃与食管胃连接部位的胃癌根治性手术切除标本120例，采用SP法免疫组织化学染色、荧光原位杂交技术和实时定量PCR检测技术检测120例胃癌中HER2蛋白表达、HER2基因扩增与ERCC1、TUBB3、TYMS基因mRNA的表达水平。 结果：1.120例胃癌中HER2蛋白的表达情况：HER2蛋白阳性表达率40.8%（49/120），其中HER2蛋白3+者占10.8%（13/120）；HER2蛋白2+者占14.2%（17/120）；HER2蛋白1+者占15.8%（19/120）。 2.49例HER2蛋白阳性表达数中HER2基因扩增率38.8%（19/49）。根据SPSS输出的结果看到，这里得到的Kappa值为0.870，此时说明两种结果的一致性较高。进一步对得到的Kappa值进行检验，而根据Kappa值检验的P值（近似值sig）看到，这里检验的P值为0，即认为计算得到的Kappa显著不为零，具有统计意义，再根据Kappa值大小的判断，最终确定IHC和FISH两者的表达水平是一致的，并且一致性较高。 3.120例胃癌中ERCC1、TUBB3、TYMS基因mRNA表达检测结果：单基因中、低表达41例、双基因中、低表达45例，ERCC1、TUBB3、TYMS基因均中、低表达19例、均无中、低表达15例。 4.选取HER2基因扩增与化疗药物敏感性标志物ERCC1、TUBB3、TYMS基因mRNA表达水平，且根据差异性三基因均中、低表达患者以联合治疗和单纯化疗的不同方式分成两组进行比较，联合方案的PFS和OS值均与DCFf方案有显著差异，且根据差异性t检验的P值看到，两个指标的差异性显著，再根据两种方案的PFS和OS的均值比较看到，联合方案比DCFf更高，进一步说明了联合方案优于DCFf方案。 结论：1.胃癌组织中HER2蛋白表达与HER2基因状态有较高的一致性。 2.HER2的不同表达模式对胃癌的靶向治疗具有潜在指导意义。 3.HER2表达阳性的患者，联合曲妥珠单抗的疗效优于单纯化疗。

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