中国明对虾幼体对卵黄蛋白的利用研究

摘要

本实验首次尝试用选择性沉淀法提纯中国明对虾的卵黄蛋白，并建立了EDTA-MgCl2提纯卵黄蛋白的方法。利用层析法(SephadexG-150，DEAE-Cellulose-52)大量提纯了中国明对虾卵巢中的卵黄蛋白，采用常规免疫方法，以纯化的卵黄蛋白作为抗原来免疫家兔，制备了卵黄蛋白的抗血清。并利用此抗血清进行对虾雌性蛋白的免疫学研究，通过免疫扩散和免疫印迹反应检测了抗血清的特异性。 利用卵黄蛋白抗血清的高特异性，建立了间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)测定中国明对虾卵黄蛋白的方法。并确立了测定参数：抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1：10000和125ng/mL卵黄蛋白；最适检测范围为10～500ng/mL；批内变异系数为5.0％，批间变异系数为6.2％。 采用ELISA方法测定了中国明对虾卵及无节幼体时期卵黄蛋白含量的变化，卵黄蛋白含量一直呈减少的趋势，N3～4至N5～6期和N5～6至Z1期两个时期卵黄蛋白的消耗量最大，分别为1322ng/mL和1213ng/mL，占卵中卵黄蛋白总量的38.9％和35.7％，Z1期以后体内基本不含卵黄蛋白。 本文测定了中国明对虾无节幼体时期几种消化酶活力。试验结果表明，在中国对虾幼体发育过程中，四种消化酶活力表现出三种变化模式。在幼体发育初期，蛋白酶就具有活力，在N3～4、N5～6时期各个酶活力均有较大幅度的增长，这与中肠腺的分化程度有关。卵黄蛋白的分解吸收与消化酶的活性密切相关。

目录

文摘

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第1章绪论

1.1研究现状

1.1.1国内外研究进展

1.1.2营养价值

1.1.3生理功能

1.2研究目的

1.3研究意义

第2章卵黄蛋白抗血清的制备

2.1引言

2.2材料和方法

2.2.1实验材料

2.2.2实验仪器

2.2.3方法

2.3结果

3.3.1 Vn的提纯

3.3.2 Vn纯化的鉴定

3.3.3 Vn抗血清检测

3.3.4 Vn抗体特异性检验

2.4讨论

附图

第3章ELISA测定中国明对虾卵黄蛋白含量方法的建立

3.1引言

3.2材料和方法

3.2.1实验材料

3.2.2实验仪器及试剂

3.2.3实验方法

3.3结果与分析

3.3.1抗血清与包被物最佳工作浓度的筛选

3.3.2反应时间对抗原—抗体反应的影响

3.3.3标准曲线的制作

3.3.4精确度

3.4讨论

第4章中国明对虾幼体发育过程中卵黄蛋白含量的测定及其营养研究

4.1引言

4.2材料和方法

4.2.1实验材料

4.2.2实验仪器及试剂

4.2.3实验方法

4.3结果

4.4讨论

4.4.1 Vn在中国明对虾幼体发育时期的变化情况

4.4.2 Vn对中国明对虾幼体生长的影响

4.4.3 Vn的幼体饵料研究

第5章中国明对虾幼体消化酶活力的测定

5.1引言

5.2材料和方法

5.2.1实验材料

5.2.2实验仪器

5.2.3 Folin—酚法测蛋白浓度

5.2.4酶活力测定

5.3结果

5.3.1 Folin—酚法测蛋白标准曲线

5.3.2消化酶活力

5.4讨论

5.4.1蛋白酶的活性

5.4.2糖酶的活性

5.4.3基因对水解酶的调控

第6章结语

参考文献

致谢