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贵州产绿臭蛙(Odorrana margaretae)皮肤活性肽基因克隆和功能研究

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第一章 文献综述

第一节 两栖类生物活性肽的研究进展

第二节两栖类皮肤活性多肽的组织分布

第三节两栖类皮肤活性多肽的种类及功能

二、抗氧化肽(antioxidant peptides)

三、抗癌肽(anticancer peptides)

四、免疫调节肽(immunoregulatory peptides)

五、神经调节肽(neuroactive peptides)

六、蛋白酶抑制剂活性肽(protein enzyme inhibitor peptides)

第四节两栖类皮肤活性多肽的应用及前景

第二章 绿臭蛙皮肤活性肽的基因克隆、序列分析

第一节 前言

第二节 材料与方法

一、 材料

二、 绿臭蛙皮肤cDNA文库构建

三、 绿臭蛙皮肤生物活性肽的基因克隆

第三节 结果与讨论

一、 cDNA双链合成及基因克隆结果

二、生物信息学分析

三、讨论

第三章 绿臭蛙皮肤活性肽的功能研究

第一节 前言

第二节 材料与方法

一、 三个多肽的化学合成

二、 功能研究

第三节 结果与讨论

一、抗菌活性

二、抗氧化活性

三、溶血活性

四、凝集素活性

五、讨论

第四章 绿臭蛙皮肤活性肽的抗肿瘤活性初步研究

第一节 前言

第二节 材料与方法

一、材料

二、方法

第三节 结果与讨论

一、 MTT法检测多肽对各肿瘤细胞生长活力的影响

二、倒置显微镜观察BGC 823细胞形态学变化

三、 磷脂酰丝氨酸外化的检测

四、讨论

总结

参考文献

攻读学位期间发表论文目录

致谢

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摘要

本研究中,从贵州省荔波县采集到5个绿臭蛙个体,并从其皮肤cDNA文库中克隆到28条cDNA序列,编码属于14个家族的属于14个家族的17种生物活性肽,仅Brevinin-1-Omar5在此前被发现,其它16种生物活性肽均为第一次发现。为了解这些生物活性肽在宿主免疫防御中的作用,从中选择与已知两栖类皮肤生物活性肽相似度最低的三个多肽(Odorranain-H-OM1,Odorranain-M-OM和 Ranatuerin-2-OM)进行化学合成及功能研究。Odorranain-H-OM1具有较为广谱的抗微生物活性,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有活性,其中包括临床分离的耐药菌株。Odorranain-H-OM1还具有抑制人肝癌细胞HepG2、人胃癌细胞BGC823、人前列腺癌细胞PC3、人结肠癌细胞Colon38及小鼠成纤维细胞L929增殖的活性。Odorranain-M-OM有明显的抗氧化活性。Ranatuerin-2-OM具有使人红细胞凝集的凝集素活性。这些生物活性肽所具有的不同活性暗示它们在绿臭蛙抵御外界环境的物理、化学和生物侵袭过程中发挥了不同的功能。

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