鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)抗氧化活性等效组分群筛选

摘要

中药发挥功效的有效物质辨识一直是中药现代化研究中的重点和难点，科学家们对此开展了大量的研究工作，提出了许多科学假说，并进行了实践验证。这些研究工作为传统中药发挥功效的现代科学内涵阐释、药材质量控制、新药创制等产生了显著成效。但是，随着社会经济不断发展，现有中药药效物质辨识研究现状已经远远不能满足社会发展需求。无论是药效物质辨识的理论研究，还是具体某味药材发挥功效的物质基础辨识，均需要引入新理念、新技术与新方法，开展深入研究，才有可能满足整个中药产业发展需求。因此，本论文以鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)为研究对象，以“等效组分群”理论为导向，以抗氧化活性药效物质辨识为着力点，通过DPPH 捕集-HPLC示踪策略，阐明鱼腥草抗氧化活性药效物质辨识基础，明确其相互作用关系，探索质量辨识模式，为其深度开发利用和质量控制提供科学依据和理论基础。主要结果如下： 1.筛选鱼腥草抗氧化活性候选等效组分群。通过鱼腥草与 DPPH 反应后，利用 HPLC 示踪，分析其色谱峰的减弱或消失，辨识鱼腥草中起抗氧化活性作用的物质，结果显示绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素为鱼腥草抗氧化活性候选等效组分群。 2.分析鱼腥草抗氧化活性候选等效组分群的DPPH清除能力。结果显示绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素清除DPPH的能力存在差异，DPPH先与槲皮素进行反应，且反应彻底，其次是阿福豆苷和槲皮苷，绿原酸与DPPH反应较慢，芦丁与异槲皮苷介于槲皮苷和绿原酸。当DPPH浓度较低时，各样品中DPPH能被完全消耗，说明具有相同的抗氧化效果；不同组成、含量及比例关系的候选等效组分群清除相同物质的量DPPH所消耗候选等效组分群的总消耗量存在差异，说明不同组成、含量及比例关系的候选等效组分群之间存在着某种相互作用关系。 3.验证鱼腥草抗氧化活性等效组分群。通过绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素模拟鱼腥草样品，结果显示除阿福豆苷之外，绿原酸、芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素均与DPPH反应，且随着DPPH的浓度升高，消耗量增大。不同的模拟样品，在DPPH加入量相同的情况下，尽管各候选组分的消耗量差异显著，但各候选等效物质的总消耗量基本一致，说明它们的抗氧化效果具有等效性；通过模拟样品与实际样品的对比分析显示，在实际样品与模拟样品中槲皮素的消耗量基本一致，说明槲皮素在反应体系中，DPPH先与槲皮素反应，再与其他物质反应。绿原酸、芦丁、异槲皮苷、槲皮苷在模拟样品消耗量大于实际样品的消耗量，说明了在实际样品中还有其他组分与DPPH发生了反应。在DPPH消耗线性浓度下，每个模拟样品的总消耗量都大于实际样品，这说明实际样品中还存在其他物质具有抗氧化活性作用，且与DPPH反应的速度快。通过不同批次实际样品与模拟样品的总消耗量的比较分析显示，在每消耗50μM DPPH时，实际样品总消耗量是模拟样品总消耗量 42-65% 之间，说明在鱼腥草中还存在其它抗氧化组分。 4.探讨基于“组分敲出”的鱼腥草抗氧化活性等效组分群中各组员的相互作用关系。结果表明在DPPH浓度为0-50μM时，绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的消耗量与DPPH浓度成线性关系，且在DPPH加入量为50μM时，DPPH 可以被消耗完全；基于每消耗50μM DPPH，所消耗抗氧化物质的量来评价抗氧化能力，如果消耗量越大说明其抗氧化活性能力越弱，反之，越强。鱼腥草的抗氧化活性等效组分的抗氧化作用强弱为：异槲皮苷 > 芦丁 > 绿原酸 > 槲皮苷 > 槲皮素 > 阿福豆苷；组分敲出实验显示消耗50μM DPPH时，敲出绿原酸后的剩余组分的消耗量大于未敲出组分的总消耗量，说明抗氧化能力减弱，说明绿原酸对鱼腥草抗氧化活性等效组分起到协同促进作用，反之，阿福豆苷，异槲皮苷，槲皮苷，槲皮素对鱼腥草抗氧化活性等效组分起到拮抗作用的，且拮抗作用的强弱为：阿福豆苷 > 槲皮素 > 槲皮苷 > 异槲皮苷 > 芦丁；绿原酸-阿福豆苷、芦丁-槲皮苷和异槲皮苷-槲皮苷后的剩余组分消耗量大于未敲出组分的总消耗量，说明抗氧化能力减弱，说明绿原酸-阿福豆苷、芦丁-槲皮苷和异槲皮苷-槲皮苷对鱼腥草抗氧化活性等效组分体系起到协同作用，且协同作用强弱为：芦丁-槲皮苷 > 绿原酸-阿福豆苷 > 异槲皮苷-槲皮苷，敲出其它两两组合则对体系起到拮抗作用，且拮抗作用强弱为：绿原酸-槲皮素 > 绿原酸-异槲皮苷 > 芦丁-异槲皮苷 > 槲皮苷-槲皮素 > 异槲皮苷-槲皮素 > 绿原酸-槲皮苷 > 阿福豆苷-槲皮素 > 阿福豆苷-异槲皮苷 > 绿原酸-芦丁 > 芦丁-槲皮素 > 阿福豆苷-槲皮苷 > 芦丁-阿福豆苷。在敲出三组分和四组分的体系中，剩余组分总消耗量都小于未敲出组分总消耗量，说明被敲出的组分都起到拮抗作用。

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摘 要

前言

第1章 文献综述

第2章 鱼腥草抗氧化活性候选“等效组分群”筛选

2.1 引言

2.2 实验部分

2.2.1 实验药品、试剂与材料

2.2.2 实验仪器

2.2.3 HPLC色谱条件

2.2.4对照溶液的配置

2.3.2 样品采集

2.3.3 样品处理

2.3.4色谱峰的指认

2.3.5 数据统计与分析

2.4.1 抗氧化组分的辨认分析

2.4.2 抗氧化组分的鉴定分析

第3章 鱼腥草候选等效组分群的DPPH清除能力分析

3.1 引言

3.2 实验部分

3.2.1 实验药品、试剂与材料

3.2.2 实验仪器

3.2.3 样品采集

3.2.4对照溶液的配置

3.2.5 DPPH溶液配置

3.2.6 含量测试用样品溶液制备

3.2.7 DPPH活性测定用样品溶液制备

3.2.9 数据统计与分析

3.3 实验结果与分析

3.3.1 不同样地鱼腥草等效组分含量分析

3.3.2 各样地中DPPH消耗量分析

第4章 鱼腥草抗氧化活性“等效组分群”筛选与验证

4.1 引言

4.2实验部分

4.2.1 实验药品、试剂与材料

4.2.2 实验仪器

4.2.3 HPLC色谱条件

4.2.4对照品溶液的配置

4.2.5 DPPH溶液配置

4.2.6样品溶液的配置

4.2.7数据统计与分析

4.3.1模拟样品可行性分析

4.3.2模拟样品的消耗量分析

4.3.3模拟样品的候选等效活性组分群各组分剩余量分析

4.3.4实际样品与模拟样品消耗量的对比分析

4.4 结果与讨论

第5章 鱼腥草抗氧化活性等效组分间的相互作用关系

5.1 引言

5.2实验部分

5.2.1 实验药品、试剂与材料

5.2.2 实验仪器

5.2.3 HPLC色谱条件

第6章 结论与展望

6.1 实验结论

6.2 创新点

6.3 展望

参考文献

附 录

致 谢