新型抗病毒剂病毒星作用机理研究

摘要

病毒星是本中心自主开发的具有高效抗TMV活性的抗病毒剂：为系统研究病毒星的作用机理，寻找病毒星抗TMV的作用靶标，本论文开展了如下工作： 采用半叶枯斑法对病毒星室内生物活性测试发现：病毒星在500μg/mL剂量下的活体治疗抑制率为66.23％，明显优于宁南霉素(500 μg/mL，45.56％)，在离体治疗、活体钝化、活体保护条件下的抑制率分别达48.53％、68.85％、48.98％，其对TMV的EC<'50>为294.47μg/mL，，剂型优化试验表明30％病毒星可湿性粉剂对TMV的活体治疗效果明显优于对照药剂宁南霉素。 抗TMV病田间药效试验：30％可湿性粉剂的病情指数均明显低于空白对照区(P<0.05)，第二十一天的防治效果达61.19-76.08％。同时田间观察发现，喷施病毒星后，烟草叶片的颜色明显变绿。以上结果表明半叶法摩擦接种的室内活体治疗效果与田间试验药效具有一定可比性，这可能意味着病毒星在室内生测心叶烟与田间试验普通烟K,-3>326叶片中的作用机制具有类似性。 开展了病毒星抗TMV生化机理初步研究：发现病毒星处理接种TMV后的烟草植株中，PAL活性、POD活性、SOD活性及叶绿素含量等相关酶和调控物质在一定的时间内都具有相关性。病毒星明显诱导了PAL，活性的升高；同时也诱导了叶绿素含量的增加。 考察了病毒星对烟草病程相关蛋白(PR)的诱导作用，结果显示：病毒星诱导烟叶中胞间蛋白的种类和TMV刺激烟叶产生的胞间蛋白的种类基本一致；且经等点聚焦电泳实验发现，三种蛋白中分子量为55 KDa的蛋白可能是核酮糖1，5-二磷酸羧化酶的一个大亚基(分子量55KDa，等电点pH 4.9)。 通过透射电镜进行病毒星钝化半小时后的病毒粒子和正常的病毒粒子形态比较，发现病毒星有使病毒粒子凝聚的倾向。

目录

声明

摘要

前言

第一章文献综述

1.1氨基膦酸酯类衍生物抗TMV活性研究进展

1.2抗TMV药剂的机理研究进展

1.2.1药剂抑制病毒浸染寄主

1.2.2药剂抑制病毒增殖和扩散

1.2.3药剂诱导植物生化机理的变化

1.2.4药剂诱导植物病程相关蛋白(PR)的产生

第二章设计思路及实验路线图

2.1选题的目的和意义

2.2论文研究的主要内容

2.3论文的创新性

2.4实验路线设计图

第三章实验与方法

3.1室内生物活性检测实验

3.1.1供试病毒

3.1.2供试烟草

3.1.3对照药剂

3.1.4仪器和试剂

3.1.5培育无病植物

3.1.6病毒提纯

3.1.7化合物溶液的配制

3.1.8抗TMV活性测试

3.2病毒星抗TMV病田间药效试验

3.2.1试验条件

3.2.2试验设计与安排

3.2.3调查与结果

3.3病毒星抗TMV作用机理初步研究

3.3.1病毒星抗TMV生化机理初步研究

3.3.2病毒星对烟草胞间病程相关蛋白(PR)的SDS-PAGE试验

3.3.3病毒星对烟草胞间病程相关蛋白的等电聚焦试验

3.3.4病毒星作用TMV粒子的电镜试验

第四章结果与讨论

4.1病毒星抗TMV生物活性结果检测

4.1.1病毒星抗TMV侵染的离体治疗生物活性检测

4.1.2病毒星抗TMV侵染的活体钝化生物活性检测

4.1.3病毒星抗TMV侵染的活体治疗生物活性检测

4.1.4病毒星抗TMV侵染的活体保护生物活性检测

4.1.5不同浓度病毒星抗TMV侵染的活体治疗生物活性检测

4.1.6不同剂型病毒星抗TMV侵染的活体治疗生物活性检测

4.1.7室内生物活性检测结果讨论

4.2病毒星田间药效试验结果与分析

4.2.1病毒星田间药效试验结果

4.2.2田间药效讨论

4.3病毒星抗TMV生化机理初步研究结果

4.3.1病毒星对接种TMV后的烟草植株中PAL活性的影响

4.3.2病毒星对接种TMV后的烟草植株中POD活性的影响

4.3.3病毒星对接种TMV后的烟草植株中SOD活性的影响

4.3.4病毒星对接种TMV后的烟草植株中叶绿素含量的影响

4.3.5病毒星抗TMV生化机理结果讨论

4.4病毒星对烟草病程相关蛋白(PR)的诱导作用初步研究

4.4.1病毒星诱导的烟草胞间PR的SDS-PAGE试验

4.4.2病毒星诱导的烟草胞间PR的等电聚焦试验

4.4.3病毒星诱导烟草胞间PR结果讨论

4.5病毒星对TMV粒子的影响研究

4.5.1病毒星对TMV侵染性影响

4.5.2病毒星处理前后TMV粒子的电镜照片

第五章结论

5.1全文结论及创新

5.2本课题综合分析及展望

致谢

参考文献

附录

图版