丁香酚对鲤鱼中枢神经NO-cGMP等信号转导影响的研究

摘要

鱼类因其独特的生理特点，对临床麻醉要求极高。研制出新型的效果好、麻醉时间长、苏醒快，药物残留少，对人和鱼安全、廉价的鱼类麻醉剂是解决这一问题的有效途径，通过考察丁香酚麻醉鲤鱼后对中枢神经系统中跨膜信号转导系统的两种ATP酶和NOS活性的影响，以及对脑组织中NO含量、cAMP和cGMP浓度的影响，探讨其发挥全麻作用的分子机制，为高效、安全的鱼类麻醉剂开发和麻醉学发展提供参考。
　　1、36尾鲤鱼，体重为900 g～1000 g，分为6组，每组6尾，水温20～22℃，试验重复5次，分别置于丁香酚乳剂的溶液中进行最佳麻醉浓度的研究，结果表明：达到麻醉期所用的时间和丁香酚的浓度成反比，其复苏时间和丁香酚浓度成正比。体重在900 g～1000 g的鲤鱼，丁香酚乳剂对其最佳麻醉浓度为40 mg/L。
　　2、将160尾鲤鱼随机分为4组，其中40尾为对照组，将其余120尾置于40 mg/L丁香酚乳剂溶液中麻醉，分别取诱导时期、麻醉时期和恢复时期鲤鱼各脑组织和脊髓，通过分光光度法测定其Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。结果：丁香酚麻醉后不同麻醉时期鲤鱼各脑组织和脊髓中两种酶的活性均不同程度的下降，丁香酚对鱼脑和脊髓中两种酶的抑制作用随麻醉的加深而加强，并在麻醉期时抑制作用最强。与对照组比较各脑组织和脊髓在麻醉期的Na+-K+-ATP酶活力均极显著降低（P<0.01）。大脑、中脑、小脑、间脑和脊髓中Ca2+-Mg2+-ATP酶活力也极显著降低（P<0.01），延脑中Ca2+-Mg2+-ATP酶活力显著降低（P<0.05）。恢复期时，两种酶活力升高，大脑、中脑、小脑和脊髓中酶活力极显著的高于麻醉期（P<0.01），但均低于对照组，且两种酶活性变化的趋势与麻醉深度的变化相一致。结论：丁香酚可明显抑制鲤鱼各脑组织和脊髓中两种酶的活性，提示丁香酚对鲤鱼的麻醉可能与其抑制 Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性有关。
　　3、应用同样麻醉和样品采集处理方法，采用ELISA方法测定不同麻醉时期鲤鱼各脑组织和脊髓中cAMP的浓度。结果：鲤鱼大脑、中脑、间脑、延脑和脊髓中cAMP浓度随着麻醉程度的加深呈增高趋势，与对照组比较各脑组织和脊髓中浓度均极显著增高（P<0.01），并在麻醉期时浓度最高。恢复期时，cAMP浓度下降，大脑、中脑、间脑和延脑中的cAMP浓度极显著低于麻醉期（P<0.01）。间脑cAMP浓度降低程度最大，极显著地低于对照组（P<0.01），而大脑、中脑、延脑和脊髓中cAMP浓度仍未恢复，其仍极显著高于对照组（P<0.01）。提示：鲤鱼大脑、中脑、间脑、延脑和脊髓中cAMP可能参与了丁香酚产生麻醉的调控过程。
　　4、应用同样麻醉和样品采集处理方法，采用ELISA方法测定不同麻醉时期鲤鱼各脑组织和脊髓中cGMP的浓度。结果：经丁香酚麻醉后不同麻醉时期鲤鱼各脑组织和脊髓中cGMP浓度均不同程度的下降，丁香酚降低鱼脑组织和脊髓中cGMP浓度的作用随麻醉的加深而加强，与对照组比，麻醉期小脑、间脑和脊髓中cGMP浓度极显著下降（P<0.01），大脑、中脑和延脑显著下降（P<0.05）。恢复期时，各脑组织中cGMP浓度升高，小脑和脊髓中显著高于麻醉期（P<0.01），脊髓几乎恢复到对照组水平，其余各脑均低于对照组。
　　5、应用同样麻醉和样品采集处理方法，通过分光光度法测定鲤鱼各脑组织和脊髓中NO含量、NOS活性和iNOS活性，结果：丁香酚可明显降低鲤鱼大脑、中脑、小脑、间脑和脊髓中NO含量（P<0.05），明显抑制NOS和iNOS活性（P<0.05）。丁香酚麻醉机制可能与抑制鲤鱼大脑、中脑、小脑、间脑和脊髓中NO代谢有关。

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1前言

1.1鱼类麻醉药的研究进展

1.2丁香酚麻醉作用的研究进展

1.3细胞信号转导概述

1.4细胞信号转导的基本内容

1.5细胞信号转导通路与麻醉的关系

2材料与方法

2.1材料

2.2方法

2.3数据统计分析方法

3结果与分析

3.1丁香酚乳剂麻醉剂量的确定结果

3.2 丁香酚乳剂对各脑组织和脊髓中两种ATP酶活性的影响

3.3丁香酚乳剂对各脑组织和脊髓中cAMP信号转导通路的影响

3.4丁香酚乳剂对各脑组织和脊髓中NO-cGMP信号转导系统的影响

4讨论

4.1麻醉药物对各脑组织和脊髓中两种ATP酶活性的影响

4.2麻醉药物对各脑组织和脊髓中cAMP含量的影响

4.3麻醉药物对各脑组织和脊髓中NO-cGMP信号转导系统的影响

4.4丁香酚全麻机制的推测

5结论

参考文献

致谢

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