凡纳滨对虾生长相关基因MLC和SEC61γ的克隆和表达分析

摘要

凡纳滨对虾作为我国重要的对虾养殖品种，在我国对虾产业中扮演着重要角色，但随着其养殖业的发展，对虾的孵化率和幼体成活率降低、抗病能力减弱、病害严重等问题日益凸显出来。利用现代遗传育种手段培育出具有优良经济性状的养殖品种是解决上述问题的有效途径，目前迫切需要进行对虾生长性状的分子机理的研究。
　　 本研究以凡纳滨对虾肌肉组织为材料，构建了一个肌肉组织全长cDNA文库，并随机选取72个克隆进行测序了分析。对文库质量结果分析，文库初始库容为8.50×106 cfu，插入片段在500～4000 bp之间，大部分片段在1000 bp以上。对随机选取的72个克隆送交测序，整理分析得到37条已有功能注释的基因序列和18条未知蛋白的核苷酸序列。
　　 另外本实验将由已构建的差减cDNA文库中获得的两个生长相关基因肌球蛋白轻链基因MLC和内质网膜转运通道蛋白基因SEC61γ的两条片段序列，通过对己构建的全长文库进行目的基因的筛选获得了上述两个基因的全长序列。凡纳滨对虾MLC基因的cDNA全长序列包含一个462 bp的开放阅读框，推测其编码的蛋白质含有153个氨基酸，预测其分子量为17.5 ku，等电点为4.67。运用荧光定量PCR的方法对MLC基因在凡纳滨对虾中表达情况进行研究，结果表明MLC基因在凡纳滨对虾的肌肉、心脏、眼柄等8个组织或器官中都有表达，其中在肌肉组织中表达量最高，而最低表达量是肝胰腺中；不同生长期肌肉组织中，表达量最高是45 d日龄的对虾，表达量最低是10d日龄。
　　 内质网膜转运通道蛋白基因SEC61γ的cDNA全长序列包含270 bp的开放阅读框，推测其编码含有89个氨基酸蛋白质，预测分子量和理论等电点分别为10.3ku和10.58。对SEC61γ基因在对虾中的表达情况进行了初步研究，结果表明SEC61γ基因在心脏、眼柄、肌肉等7个组织或器官中均有表达，其中表达量最高的是肌肉组织，表达量最低的是肠；不同生长期肌肉中，表达量最高是10 d日龄的对虾，表达量最低是45 d日龄。