冬凌草种子质量标准及检验规程的研究

摘要

目的：通过对冬凌草种子的检验规程、质量标准、真实性以及致病菌等方面的研究,为冬凌草种子的检验和质量标准的制定提供参考依据。
　　方法：通过对千粒重、发芽率、含水量、生活力等常规指标的不同检测条件及检测方法进行对比分析,找出适合冬凌草种子的检验方法。
　　对不同产地的40份冬凌草种子的净度、千粒重、发芽率、发芽势、含水量、生活力及带菌率等指标进行测定。采用 SPSS17.0 分析软件对各检测结果进行分析,得出划分等级的主要指标并制定出冬凌草种子质量的分级标准。
　　分别采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及高效液相色谱法(HPLC)对不同地区的冬凌草种子进行分析,找出冬凌草种子的特征图谱,以用于冬凌草种子的真实性判断。
　　运用不同培养基及不同处理方法对冬淩草种子内、外部带菌情况进行检测,选出合适的健康度检测方法,并找出影响冬凌草种子发芽的主要菌种。
　　对不同贮藏年限的冬凌草种子进行发芽率、千粒重、生活力、可溶性蛋白含量测定(采用考马斯亮蓝G—250染色法)、过氧化物酶活性测定(采用愈创木酚法)、丙二醛含量测定(采用硫代巴比妥法),进而比较不同贮藏年限的冬凌草种子生理指标变化对种子质量的影响。
　　结果及结论：
　　1. 制定出冬凌草种子检验规程。
　　2. 通过分析得出发芽率为冬凌草种子质量分级的主要指标,发芽势和千粒重为质量分级的重要参考指标。将冬凌草种子的质量分为三级,一级种子发芽率不低于89%,发芽势不低于81%,千粒重不低于0.56g；二级种子发芽率为78%~89%,发芽势为70%~81%,千粒重为0.53 g~0.56 g；三级种子发芽率为71%~78%,发芽势为57%~70%,千粒重为0.52g~0.53 g。
　　3. 由电泳图谱可知,冬凌草种子可溶性蛋白条带丰富,不同地区的冬凌草种子可溶性蛋白条带的相似度极高,共得到18条共有谱带；通过采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》软件对冬凌草种子的高效液相特征图谱的相关参数进行自动匹配可得共有特征峰6个,其中5号峰为冬凌草甲素色谱峰。
　　通过对两种指纹图谱结果进行对比分析发现：两种指纹图谱技术结果都比较直观、稳定,但各自单独应用于冬凌草种子真实性的检测又各有薄弱之处。HPLC法冬凌草甲素峰的位置很明确,但特征峰数相对较少；SDS-PAGE 凝胶电泳法中各个样本一致性条带较多,但蛋白条带与冬凌草种子本身所具有特征化学成分之间的关系不甚明确,因此,可考虑采用两种方法相结合的检测方式最终确定种子的真实性。
　　4. 确定冬淩草种子健康度检查的最佳方法为：直接涂布培养法(外部菌检测法)和琼脂平皿法(内部菌检测法)。通过致病菌鉴定发现,链格孢属真菌对冬淩草种子正常萌发影响较大且出现频率最高。因此,将链格孢属真菌作为影响冬凌草种子的主要菌种。
　　5. 通过对冬凌草种子千粒重、发芽率、生活力等常规指标的检测发现：随着贮藏年限的延长,各常规指标均呈下降趋势；种子活力与可溶性蛋白含量,POD酶含量呈正相关,与 MDA 含量呈负相关。实验结果表明,冬凌草种子活力下降的原因可能与这些生理生化指标的变化有关。因第二年冬凌草种子发芽率已低至48%,建议人工种植时采用新种子,冬凌草种子的最长贮藏年限为2年。

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前言

实验1 冬凌草种子检验规程的研究

1 实验材料

2 实验方法[13-16]

3 结果与分析

4 小结

实验2 冬凌草种子质量分级标准的研究

1 实验材料

2 实验方法

3 结果与分析

4 小结与讨论

实验3 冬凌草种子真实性的研究

1冬凌草种子可溶性蛋白SDS-PAGE特征图谱的研究

2 冬凌草种子HPLC特征图谱的研究

3 小结与讨论

实验4 冬凌草种子内部病原微生物的研究

1 实验材料

2 实验方法[13,33-38]

3 结果与分析

4 小结与讨论

实验5 不同贮藏年限对冬凌草种子质量的影响

1 实验材料

2 实验方法

3 结果与分析

4 小结与讨论

结论

致谢

参考文献

附录