清热止血方、雷公藤多苷通过干预肾小球系膜细胞-足细胞轴中TNF-α、BCL-2治疗紫癜性肾炎蛋白尿的体外研究

摘要

目的 观察清热止血方、雷公藤多苷、清热止血方和雷公藤多苷、肝素和强的松不同含药血清对过敏性紫癜性肾炎(HSPN)aIgA1 所造细胞损伤模型 TNF-α和凋亡基因BCL-2mRNA表达的影响,探讨清热止血方、雷公藤多苷降低HSPN蛋白尿的分子机制。
　　方法 纯化血尿伴蛋白尿型 HSPN 患儿和健康对照者的血清得到 IgA1,采用热聚合方法得到聚合IgA1。SD大鼠随机分4组,分别使用清热止血方、雷公藤多苷片、TW+清热止血方混悬液灌胃、强的松混悬液灌胃+肝素尾静脉注射,经腹主动脉取血制备各组血清。将同步化的细胞随机分为 6 组,分别用不同来源的聚合IgA1刺激系膜细胞、聚合IgA1和聚合IgA1系膜细胞共培养上清刺激足细胞,用MTT 法检测系膜细胞增殖情况、ELISA 法检测系膜细胞及足细胞 TNF-α、RT-PCR检测足细胞BCL-2mRNA,加各组含药血清继续培养48h,检测上述各项指标的变化。
　　结果 HSPN患者的aIgA1刺激系膜细胞在浓度达到0.25mg/ml时吸光度便较无FBS组有了统计学差异,健康对照组在刺激浓度达到0.5mg/ml时也有了较其它组有统计学差异的吸光度。HSPNaIgA1组在干预系膜细胞24h时较健康对照组分泌TNF-ɑ显著增高,有统计学差异(P<0.05),而健康对照组与阴性对照组和胎牛血清组无统计学差异。无论是HSPNaIgA1组、患者上清组还是健康聚合IgA1组在干预足细胞时均较阴性对照组分泌TNF-ɑ增高、下调BCL-2mRNA明显,均有统计学差异。其中以患者上清组作用最强,健康聚合IgA1组作用最弱。含药血清干预系膜细胞损伤模型时清热止血方+TW组下调吸光度效果最好,较清热止血方组和对照组有统计学差异(P<0.05),而与其它组无统计学差异(P>0.05)。在下调 TNF-ɑ 分泌方面,各组均较对照组和清热止血方组有统计学差异(P<0.05),以清热止血方+TW组下调TNF-ɑ分泌能力最强,但与其它组无组间统计学差异(P>0.05)。在下调 TNF-ɑ 分泌和上调 BCL-2mRNA 表达方面,在干预上清组足细胞损伤模型时以强的松+肝素组下调TNF-ɑ分泌和上调BCL-2mRNA表达效果最好,但均与清热止血方+TW组和TW组无统计学差异(P>0.05)。
　　结论 HSPN 患者的 aIgA1 可以刺激系膜细胞增殖,上调系膜细胞和足细胞TNF-ɑ的分泌,下调足细胞BCL-2mRNA的表达,HSPNaIgA1与系膜细胞共培养上清在上调足细胞TNF-ɑ的分泌和下调足细胞BCL-2mRNA的表达上较aIgA1作用更强。清热止血方+TW和强的松+肝素均可以下调系膜细胞与aIgA1共培养上清和足细胞TNF-ɑ的分泌、上调足细胞BCL-2mRNA的表达,清热止血方与TW联合用药作用强于单独用药。由此推断清热止血方+TW可通过下调系膜细胞-足细胞轴中TNF-ɑ的分泌而保护足细胞,在这个轴上的作用机制与强的松+肝素相似。

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中文摘要

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前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 统计学方法

结果

1 入组患者和健康对照者的一般情况

2 不同来源IgA浓度

3 IgAl纯化

4 系膜细胞MTT

5 系膜细胞损伤模型TNF-ɑ分泌

6 足细胞损伤模型

7 药物干预足细胞损伤模型

8 药物干预足细胞损伤模型

结论

讨论

参考文献

致谢

附录