siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白表达的影响

摘要

目的：利用小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达，观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)-2，-9及基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitorsof metalloproteinases，TIMPs)-1，-2蛋白表达的影响。 方法：以稳定转染携带VEGF-siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组，以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组。20只裸鼠随机分为4组，每组5只，将各组细胞分别接种于裸鼠皮下。47天后，剥离瘤体。用免疫细胞化学法及免疫组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF，MMP-2，-9及TIMP-1，-2的蛋白表达；并用明胶酶谱法(gelatinzymography)及蛋白免疫印迹法(western blot)分别半定量分析移植瘤组织中MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白表达量。 结果：各组培养细胞及移植瘤VEGF染色结果显示，VEGF-siRNA1组与实验对照和空白对照组相比平均阳性率降低，平均灰度值增高，差异均具有统计学意义(P<0.05)；VEGF-siRNA2组，与实验对照和空白对照组相比平均阳性率降低，平均灰度值增高，差异均具有统计学意义(P<0.05)。各组培养细胞免疫化学染色均未检测出MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白的阳性表达；各组移植瘤免疫组织化学染色结果显示MMP-9，TIMP-1，-2可见阳性表达，但各组染色平均阳性率及平均灰度值之间的差异，尚不具统计学意义(P>0.05)，而MMP-2未见明显阳性表达。移植瘤组织蛋白提取物半定量分析中，明胶酶谱实验结果显示MMP-9酶原及活性MMP-9酶条带，各组间条带酶量差异不具统计学意义(P>0.05)，可见到少量MMP-2酶原条带，但各组间条带酶量差异亦不具统计学意义(P>0.05)；蛋白免疫印迹结果显示各组间TIMP-1蛋白表达量差异不具统计学意义(P>0.05)；未得到TIMP-2的理想条带，无检测结果。 结论：以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因，可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达，但是对MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白的表达无明显影响。因此，我们认为VEGF与MMPs、TIMPs在人舌癌的血管生成及肿瘤浸润转移中的作用受多种因素调节影响。

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文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

前言

1.siRNA抑制人舌癌Tca8113细胞VEGF蛋白表达对MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白表达影响的体外研究

1.1材料

1.2方法

1.3结果

2.siRNA抑制人舌癌Tca8113细胞VEGF蛋白表达对MMP-2，-9及TIMP-1，-2蛋白表达影响的体内研究

2.1材料

2.2方法

2.3结果

3.讨论

参考文献

附录

综述　VEGF与MMPs及其抑制剂在恶性肿瘤中的作用及相互关系

致谢