硫胺素、叶酸对柯萨奇B病毒感染的心肌细胞保护作用的研究

摘要

目的:
　　 在细胞水平上探讨硫胺素、叶酸及其合剂对柯萨奇B3(CVB3)病毒感染的心肌细胞是否具有保护作用。
　　 方法:
　　 1.用胰酶-差速贴壁法后，将心肌细胞分为两组进行体外培养，其中一组细胞加入抑制剂5-溴脱氧尿苷(5-BrdU)作为对照。每天观察记录两组心肌细胞的大小、形态和搏动频率，计算1、3、5、7天心肌细胞的阳性率，并用MTT法绘制心肌细胞体外生长曲线。两组心肌细胞的搏动频率比较用t检验与单因素方差分析，心肌细胞α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)抗体阳性率的比较采用x2检验。
　　 2.明确心肌细胞的最佳干预时间后，用柯萨奇B3(CVB3)病毒致心肌细胞损伤，使用最大无毒剂量(TC0)的硫胺素、叶酸及其合剂，分别用4类方式处理心肌细胞，即药物在病毒前(Ⅰ)、后(Ⅱ)加及药物与病毒同时(Ⅲ)、在药物与病毒作用后(Ⅳ)加入，待CVB3感染的心肌细胞病变程度达“++++”时，采用MTT比色法测定心肌细胞OD值，并结合心肌细胞病变程度(CPE)、搏动频率及心肌酶等多项指标，观察两种维生素及其合剂对心肌细胞的保护作用。配伍组比较用单因素方差分析。
　　 结果:
　　 1.使用浓度为0.08％的胰酶可成功培养乳鼠心肌细胞，5-BrdU组和非抑制剂组的细胞在形态学及搏动性上差异不大。72h后心肌细胞同步性搏抑制剂组的细胞在形态学及搏动性上差异不大。72h后心肌细胞同步性搏动。经α-横纹肌肌动蛋白(α-SA)鉴定，除第1天外，第3、5、7天抑制剂组的心肌细胞阳性率均高于非抑制组，差别有统计学意义(P＜0.05)。在1-7天培养期间，第3天为指数生长期的中期，细胞生长最旺盛，在第4天后，细胞生长缓慢进入平台期，细胞增殖速度明显降低。
　　 2.硫胺素、叶酸及其合剂按照四种方式处理后发现，在Ⅰ、Ⅱ种方式中，药物组OD值与病毒对照组OD值比较差异有显著性(P＜0.05)，在Ⅲ、Ⅳ类作用方式中，药物组OD值与病毒对照组OD值比较差异无显著性(P＞0.05)。药物组心肌细胞搏动频率较病毒组心肌细胞搏动频率高，有显著差异(P＜0.05)，CPE减轻，心肌酶显著降低(P＜0.05)，但药物组与正常组比较仍较高(P＜0.05)。
　　 结论:
　　 1.使用胰酶消化-差速贴壁以及5-Brdu法进行乳鼠心肌细胞的培养，单细胞收获率高，细胞存活率高，心肌细胞和非心肌细胞分离较彻底，心肌细胞纯度较高，此方法建立的心肌细胞体外模型可以满足后继干预实验的要求。心肌细胞培养的第3天，即72h时点，是对心肌细胞进行干预并观察处理效应的最佳时间。
　　 2.体外使用柯萨奇B3(CVB3)病毒可损伤心肌细胞。硫胺素、叶酸及其合剂可提高心肌细胞的存活率，明显提高搏动的心肌细胞数量及心肌细胞的搏动频率，降低CPE及心肌酶产生，对心肌细胞具有一定的保护作用。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

实验一 乳鼠心肌细胞体外培养模型的建立

引言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.小结

实验二 硫胺素与叶酸体外对CVB3感染心肌细胞的作用

引言

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

4.小结

参考文献

全文总结

综述 未成熟心肌细胞体外培养概要及其应用进展

致谢