广西两所三甲医院住院患者人芽囊原虫感染现状、基因分型及体外药敏试验

摘要

目的：了解广西两所三甲医院住院患者人芽囊原虫（Blastocystishominis，B.h）的感染情况;确定住院患者B.h感染株的基因分型，揭示未知基因型B.h分离株的遗传距离及遗传多态性;探讨甲硝唑、替硝唑、阿奇霉素、诺氟沙星4种药物对B.h的作用效果。
　　方法：收取广西三甲医院（广西医科大学第一附属医院、广西医科大学附属肿瘤医院，以下分别简称一附院和肿瘤医院）住院患者新鲜粪便，采用改良酸醚沉淀法，镜检定性诊断，用R语言软件分析住院患者与正常人群、胃肠疾病患者与非胃肠疾病患者、两所医院住院患者性别、职业、年龄、民族及受教育水平各组间B.h感染率。收集经鉴定的阳性虫体，37℃厌氧培养，提取阳性虫体DNA;以基因组DNA为模板，采用7对STS特异性引物进行PCR扩增明确其基因分型;把未知基因型分离株作为研究对象应用RAPD标记技术构建条带图谱，用NTSYSpc软件对分离株的遗传多样性进行聚类分析，构建聚类分析图。最后采用MTT法检测B.h对甲硝唑、替硝唑、阿奇霉素、诺氟沙星的药敏反应，观察4种药物对B.h的作用效果。
　　结果：(1)两所医院共检查住院患者2800例，总阳性率为36.6％。一附院与肿瘤医院阳性率分别为22.59％、43.24％。与正常人群感染率相比，住院患者感染率高于正常人群(P=0.000);肿瘤患者与非肿瘤患者、正常人群感染率相比，差异有统计学意义(P=0.000);按照胃肠科室与非胃肠科室分组，两组感染率差异有统计学意义(P=0.000);按照文化程度、职业划分，两所医院初中及以下学历患者(P=0.000)、农民患者感染率较其他文化程度患者感染率差异有统计学意义(P=0.000);按照性别、年龄、民族分组，两所医院各组间感染率差异没有统计学意义(P＞0.05)。(2)STS基因分型结果显示，共57例标本，有36例标本被分型，其中单纯1型2株、单纯2型20株、单纯3型3株、单纯4型3株、单纯6型5株、单纯7型3株，剩余21例为未知基因型;1型、4型、7型共扩增出8株，且8株均为一附院住院患者分离株，3型3株均为肿瘤医院住院患者分离株;一附院与肿瘤医院患者STS基因分型已知型占全部例数的比例分别为87.5％、53.7％，经卡方检验差异有统计学意义。RAPD结果显示21例分离株的遗传相似系数Sij在0.615～0.923之间;从聚类分析树可将21例B.h可划分为8个枝系。(3) MTT法检测药敏实验结果显示甲硝唑、替硝唑、阿奇霉素、诺氟沙星4种药物均对B.h有抑制作用，且随着浓度的增加(10、20、40、80μg/ml)其平均细胞抑制率是在不断增加;经R语言软件计算4种药物在24h、48h、72h时间段的IC50值，加入药物24h后，甲硝唑、替硝唑、阿奇霉素、诺氟沙星的IC50值分别为159.77、80.47、162.5、77.27μg/ml;加入药物48h后，IC50值分别为1147、440.9、2847、169.2μg/ml;加入药物72h后，IC50值分别为2146、1967、8031、7895μg/ml。
　　结论：(1)住院患者感染率较正常人群感染率高，肿瘤患者感染率高于非肿瘤患者和正常人群感染率，胃肠科室住院患者感染率高于非胃肠科室住院患者感染率。(2)在住院患者中存在1、2、3、4、6、7型，未见5型，且2型为优势基因型。(3)21例未知基因型基因结构复杂，遗传差异明显。(4)诺氟沙星对抑制B.h的生长与繁殖作用明显。

目录

声明

个人简历

摘要

前言

参考文献

第一部分 广西两所三甲医院住院患者人芽囊原虫感染情况调查

1 调查对象与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 B．h基因分型的研究

一、57株B．h基因组DNA的提取

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

二、基因型鉴定

1．材料、试剂与设备

2 STS基因型鉴定

3 基因分型结果

三 RAPD分析21例未知基因型B．h分离株

1 实验材料

2 实验方法

3．结果

讨论

参考文献

第三部分 B．h体外药敏实验的研究

1．材料与试剂设备

2 对B．h药敏实验的研究

3 讨论

参考文献

结论

附录

综述 人芽囊原虫的研究进展

致谢

硕士期间发表的论文