Apelin对葡萄糖毒性作用及胰岛细胞PDX-1蛋白表达的影响

摘要

目的:1.探讨Apelin是否通过参与葡萄糖毒性作用机制引起胰岛素释放减少。2.研究Apelin与PDX-1蛋白合成的关系。
　　方法:复苏并培养好的胰岛β细胞株小鼠NIT-1细胞接种于25ml培养瓶（1×107cells/瓶），在各不同浓度葡萄糖的含血清RPMI1640培养液中培养3天。随机分组如下:(1)正常对照组1:葡萄糖的浓度为5.6 mmol/L。(2)正常对照组2:葡萄糖的浓度为5.6mmol/L+Apelin-36(1μmol/L)。(3)高糖组1:葡萄糖的浓度为16.7mmol/L。(4)高糖组2:葡萄糖的浓度为16.7mmol/L+Apelin-36(1μ mol/L)。(5)极高糖组1:葡萄糖的浓度为33.3mmol/L。(6)极高糖组2:葡萄糖的浓度为33.3mmol/L+Apelin-36(1μ mol/L)。然后进行:1.基础Ins释放试验:将各组胰岛β细胞移到1 ml离心管(1×106cells/管)中，预孕育在HBSS液（37℃孕育60分钟）中，用PBS洗涤2次后，在含葡萄糖浓度为5.6 mmol/L的HBSS缓冲液中37℃预孕育60min，弃掉缓冲液，然后将细胞置于1 ml含葡萄糖浓度为5.6mmol/L（基础）和葡萄糖浓度为16.7mmol/L（葡萄糖刺激）的HBSS缓冲液中37℃育1h，收集反应液，然后用ELISA法测定Ins含量。2.细胞内Ins含量测定:取各组培养好的小鼠NIT-1细胞到1ml离心管（1×106cells/管），进行反复的冷冻溶解破碎然后以酸化乙醇溶液进行抽提，4℃孵育16～24 h，用ELISA法测定Ins含量。3.PDX-1蛋白的表达:收集各组NIT-1细胞进行涂片，用4％的多聚甲醛溶液固定20 min，PBS冲洗3次每次3min，按照S/P免疫组化试剂盒的说明书进行操作。在显微镜下计算各组细胞的阳性细胞数。4.PDX-1mRNA的表达:取各组新鲜的小鼠NIT细胞涂片，用4％多聚甲醛/0.1％DEPC/0.1mmol/L PBS(pH7.2～7.6)固定20～30min，按照PDX-1原位杂交试剂盒的说明书进行操作，在显微镜下计算各组细胞的阳性细胞数。
　　结果:①与正常组1比较，高糖组1和极高糖组1的基础和刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素均明显减少(P＜0.05);②加Apelin的正常组2的基础和刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素与正常组1相比，无明显差异(P＞0.05);③加Apelin的高糖组2和极高糖组2的细胞内胰岛素、基础和刺激后胰岛素分泌分别较高糖组1和极高糖组1明显下降(P＜0.05);④与正常组1比较，高糖组1和极高糖1的PDX-1蛋白表达下降(P＜0.05);⑤加Apelin的正常组2的PDX-1蛋白表达与正常组1相比，无明显差异(P＞0.05);⑥加Apelin的高糖组2和极高糖组2的PDX-1蛋白表达分别较高糖组1和极高糖组1明显下降(P＜0.05);⑦各浓胰岛素水平与PDX-1蛋白表达呈正相关，与PDX-1mRNA表达无关;⑧各组间PDX-1mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:Apelin可能通过降低PDX-1蛋白表达，参与葡萄糖毒性作用，引起胰岛素分泌减少，从而在糖尿病的发病机制中发挥作用。

目录

声明

个人简历

中英文缩写对照

摘要

前言

材料和方法

一、材料

二、方法

结果

讨论

一、葡萄糖毒性作用

二、Apelin与葡萄糖毒性作用的关系

三、Apelin与PDX-1蛋白表达的关系

四、总结

结论

参考文献

综述

致谢

硕士期间发表的论文