HB-EGF对肝癌细胞迁移的影响机制及TNFR2基因多态性与HBV相关性肝病遗传易感性的研究

摘要

目的:
　　1.从体外实验观察HB-EGF对人肝癌细胞株SMMC7721迁移的影响，并以FAK为靶点，研究HB-EGF对FAK信号通路的影响。
　　2.通过对肿瘤坏死因子受体Ⅱ基因rs1061622和rs1061624两个位点多态性的研究，在广西人群中探讨TNFR2基因与乙型肝炎、肝硬化、肝癌的遗传易感性。
　　方法:
　　1.Transwell迁移试验评价不同浓度HB-EGF对人肝癌细胞SMMC7721迁移能力的影响;采用Western Blot技术分析HB-EGF对FAK的表达及磷酸化水平的影响。
　　2.收集广西115例肝炎患者、86例肝硬化患者、272例肝癌患者和269例健康体检者，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测TNFR2两个位点的基因型。应用SPSS16.0对资料进行分析，计数资料的比较采用卡方检验，计量资料的比较采用t检验，Logistic回归模型计算相对危险度并校正混杂因素。
　　结果:
　　1.Transwell迁移试验发现HB-EGF对人肝癌细胞株SMMC-7721有趋化迁移的作用，当HB-EGF浓度为10ng/mL时，肝癌细胞的迁移率最大。WestemBlot实验结果发现:HB-EGF可以促进FAK(Tyr397)的磷酸化，和FAK蛋白表达水平。FAK抑制剂FAKI-14能够明显阻断HB-EGF诱导肝癌细胞的迁移。
　　2.rs1061622位点共有TT、TG、GG三种基因型，各基因型及等位基因在CHB组、LC组和HCC组中分布频率的差异均无统计学意义(P＞0.05)，提示rs1061622基因多态性可能与CHB、LC和HCC的患病风险无相关性。rs1061624位点共有GG、GA、AA三种基因型，AA基因型可增加CHB和LC的患病风险(P=0.026，OR=2.666，95％CI=1.126-6.316;P=0.027，OR=2.947，95％CI=1.130-7.689)，GA基因型可增加HCC的患病风险(P=0.046，OR1.563,95％CI=1.009-2.422)。
　　3.我们在性别分层分析中发现:在男性人群中，rs1061624位点hA基因型患CHB和LC的风险分别是GG基因型的4.280倍和3.361倍(P=0.011，95％CI=1.405-13.041; P=0.031，95％CI=1.114-10.146)，A等位基因患CHB的风险是G等位基因的1.668倍(P=0.028，95％CI=1.056-2.634)。
　　4.我们在年龄分层分析中发现:在年龄＜50岁人群中，rs1061624位点AA基因型患CHB和LC的风险是GG基因型的3.000倍和5.694(P=0.029，95％CI=1.122-8.027;P=0.017，95％CI=1.367-23.717)，GA基因型患LC的风险是GG基因型的2.712倍(P=0.046，95％CI=1.019-7.216)。A等位基因患LC的风险是G等位基因的1.719倍(P=0.036，95％CI=1.036-2.854)
　　5.在吸烟分层分析中发现:在非吸烟人群中，rs1061624位点AA基因型患LC的风险是GG基因型的3.855倍（P=0.032，95％CI=1.122-13.239）。
　　6.在饮酒分层分析中发现:在饮酒人群中，rs1061624位点hA基因型患CHB的风险是GG基因型的6.096倍。
　　7.在民族分层分析中发现:在汉族人群中，rs1061624 A等位基因患HCC的风险是G等位基因的1.497倍（P=0.044，95％CI=1.011-2.216）;AA基因型可增加CHB和HCC的患病风险(P=0.021，OR=3.969，95％CI=1.235-12.752; P=0.031, OR=3.390,95％CI=1.120-10.263), GA基因型可增加HCC及LC的患病风险(P=0.035，OR=1.975，95％CI=1.048-3.722;P=0.034, OR=2.706,95％CI=1.077-6.800)。
　　结论:
　　1.HB-EGF通过FAK途径影响肝癌细胞的迁移。
　　2.TNFR2rs1061622位点基因多态性与HBV相关性肝炎、肝癌、肝硬化的患病风险无关。
　　3.TNFR2 rs1061624位点的AA基因型与HBV相关性肝炎、肝硬化的患病风险有关，可能是HBV相关性肝炎、肝硬化的危险因素;GA基因型与肝癌患病风险有关，可能是肝癌的一个危险因素。
　　4.分层分析中发现rs1061624位点的hA基因型可能是男性人群、汉族人群、饮酒人群和年龄＜50岁人群肝炎的危险因素，也是男性人群、非吸烟人群和年龄＜50岁人群肝硬化的危险因素，还是汉族人群肝癌的危险因素。GA基因型可能是汉族人群和年龄＜50岁人群肝硬化的危险因素，也是汉族人群肝癌的危险因素。A等位基因可能是男性人群肝炎的危险因素，也是汉族人群肝癌的危险因素，还可能是年龄＜50岁人群肝硬化的危险因素。

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摘要

第一部分 HB-EGF对肝癌细胞迁移的影响及机制研究

前言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

综述一 HB-EGF的生物学功能概述

第二部分 TNFR2基因多态性与HBV相关肝炎、肝硬化、肝癌的遗传易感性研究

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述二 肿瘤坏死因子受体基因多态性与疾病遗传易感性的研究进展

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