雷帕霉素对大鼠视网膜缺血再灌注所致视网膜损伤中基质金属蛋白MMP-9表达的影响

摘要

目的:探讨雷帕霉素对视网膜缺血再灌注所致视网膜损伤的保护作用和机制，及其保护效果是否通过降低基质金属蛋白MMP-9的表达来实现。
　　方法:按随机分组的原则将81只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组、实验对照组、实验组，每组27只。所有大鼠均取右眼为实验对象。实验对照组和实验组行前房灌注，建立视网膜缺血再灌注(retinal ischemia-reperfusion，RIR)模型。实验组在前房灌注前2h按2mg/kg的剂量腹腔注射雷帕霉素。实验对照组大鼠腹腔注射等量的生理盐水和二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)。分别在灌注前，灌注后0h、6h、12h、24h、48h取视网膜标本，HE染色光镜观察视网膜组织变化;提取total RNA并进行荧光定量实时PCR(quantitative Real time PCR，qRT-PCR)，检测三组中MMP-9 mRNA不同时间点，在视网膜组织上的表达水平的变化;进一步应用Western Blotting法检测大鼠视网膜缺血再灌注损伤后，MMP-9蛋白质表达水平的变化。
　　结果:(1)HE染色显示视网膜缺血再灌注后早期，视网膜内层水肿增厚，晚期视网膜神经节细胞数目减少及视神经纤维层萎缩变薄。雷帕霉素治疗组组织变化趋势与缺血组相似，细胞数目减少及视网膜厚度变薄的程度均较缺血组有明显改善。(2) MMP-9的表达自再灌注后6小时开始增加，24小时后达到高峰(mRNA和蛋白质的相对含量分别为7.6±0.16和5.6±0.26)。(3)各个时间段（RIRI后6h，12h，24h，48h）缺血组MMP-9的表达与正常对照组比较有统计学差异(P＜0.01)，雷帕霉素治疗组与缺血再灌注组比较差异有统计学意义(P＜0.01).
　　结论:雷帕霉素对RIRI有保护作用，可能通过抑制了RIRI中MMP-9的表达而发挥作用。

目录

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个人简历

摘要

前言

1．实验材料

1．1 研究对象

1．2 试剂及仪器

2．实验方法

2．1 实验分组

2．2 视网膜缺血再灌注损伤模型的建立

2．3 标本采集和处理

2．4 HE染色步骤

2．5 TUNEL凋亡检测

2．6 real-time PCR测定视网膜中MMP-9 mRNA的表达量

2．7 Western blotting测定视网膜中MMP-9蛋白的表达量

2．8 统计学分析

3 实验结果

3．1 HE染色结果

3．2 real-time PCR测定视网膜中MMP-9 mRNA表达的影响

3．3 Western-Blotting测定视网膜中MMP-9蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

综述

本文英文／中文及简写对照

致谢