内皮素-1在心房颤动心房纤维化中的作用研究

摘要

心房颤动（房颤）是最严重的心房电活动紊乱，严重威胁着人类的健康。目前房颤的发病机制仍不十分明确，心房电重构、结构重构以及心脏自主神经系统紊乱在其中起着重要的作用。心房纤维化作为心房结构重构最显著的特征，在房颤中的作用越来越受到重视。心房纤维化是多种心血管疾病的最终结局，一旦发生心房纤维化改变，房颤将更加难于逆转和治疗。因此，探索心房纤维化的发病机制，寻找新的纤维化相关信号通路，将为房颤的防治提供新的思路与理论依据。内皮素-1(endothelin-1，ET-1)是一种重要的血管活性多肽，近期研究表明房颤患者心房以及外周血ET-1表达明显升高，ET-1升高是预测房颤射频治疗后复发的重要预测指标，提示ET-1在房颤的发展过程中起着重要的作用，但是它具体通过何种机制参与房颤的发生，尚未见文献报道。血小板源生长因子-B(platelet derivedgrowth factor-B，PDGF-B)是目前已知的最重要的致心房纤维化因子之一，在心房纤维化的过程中起着重要作用。研究表明ET-1可以促进人肾小球系膜细胞PDGF分泌，是否在心房中ET-1也通过促进心肌细胞分泌PDGF导致心房纤维化则有待进一步研究。
　　72例开胸心脏手术患者，分为房颤组（39例），窦律组（33例），采用HE染色观察两组患者右心耳组织形态改变，Masson染色观察胶原纤维沉积情况;荧光定量PCR、 Western-blot、免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）检测两组患者右心耳ET-1、PDGF-B、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ，COL1)的mRNA及蛋白表达;采用ET-1以及ET-1受体阻滞剂磺胺异恶唑(sulfisoxazole，SIZ)干预H9c2大鼠心肌细胞，检测其对H9c2细胞PDGF-B表达的影响，从而探讨ET-1在房颤心房纤维化中的作用。
　　研究结果显示:(1)房颤组患者右心耳ET-1 mRNA表达水平（2.8300±2.2764）明显高于窦性心律组（1.2197±0.8872），P＜0.01;蛋白表达水平（0.8349±0.2413）亦明显高于窦律组（0.2860±0.0828），P＜0.01。
　　(2)房颤组患者右心耳PDGF-B mRNA表达水平（2.5675±2.3481）明显高于窦律组（1.5674±0.8314），P＜0.05;蛋白表达水平（0.8074±0.2407）亦明显高于窦律组（0.3806±0.1049），P＜0.01。(3)房颤组患者右心耳Ⅰ型胶原α1亚基mRNA表达水平（3.3761±1.5977）明显高于窦律组（1.6292±0.8329），P＜0.05;蛋白表达水平（0.6524±0.2097）亦明显高于窦律组（0.3123±0.1218），P＜0.05。(4)两组患者右心耳ET-1蛋白表达水平与PDGF-B蛋白表达水平亦呈明显的正相关（r=0.619，P＜0.01），ET-1蛋白表达水平与Ⅰ型胶原蛋白表达水平呈明显的正相关（r=0.580，P＜0.01）。(5) Masson染色提示房颤组右心耳胶原纤维沉积明显多于窦性心律组患者。(6) ET-1可以促进H9c2细胞分泌PDGF-B，并表现出浓度依赖性和时间依赖性。SIZ可减轻ET-1对H9c2细胞PDGF-B合成的促进作用。
　　综上所述，ET-1在房颤心房纤维化中起着重要作用，其可能通过调控PDGF-B参与房颤的发生。

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摘要

前言

第一部分 内皮素-1与心房颤动心房纤维化相关性的研究

材料与方法

1．研究对象

2．主要仪器

3．主要试剂

4．实验方法

5．统计方法

1．窦性心律组与心房颤动组患者右心耳组织形态学比较

2．窦性心律组与心房颤动组患者右心耳胶原纤维沉积比较

3．窦性心律组与心房颤动组患者右心耳内皮素-1、血小板源生长因子B、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白表达

4．窦性心律组与心房颤动组患者右心耳内皮素-1、血小板源生长因子B、Ⅰ型胶原的组织表达差异

5．窦性心律组与心房颤动组患者右心耳内皮素-1与血小板源生长因子B蛋白表达水平的相关性分析

6．窦性心律组和心房颤动组患者右心耳内皮素-1与Ⅰ型胶原蛋白表达水平的相关性分析

讨论

结论

第二部分 内皮素-1对血小板源生长因子B调控作用的研究

材料与方法

1．主要仪器

2．主要试剂

3．实验方法

4．统计方法

2．内皮素-1培养不同时间对H9c2细胞血小板源生长因子B表达的影响

3．内皮素受体拮抗剂对内皮素-1培养下H9c2细胞血小板源生长因子B表达的影响

讨论

结论

1．研究结论

2．创新点和新见解

3．本研究不足之处

参考文献

综述

致谢